تشخیص، بررسی فیلوژنی و کلونینگ ژن g گلیکوپروتئین ویروس سپتی سمی هموراژیک (vhsv) جدا شده از ماهی قزل آلای رنگین کمان (onchorhynchus mykiss)

بیماری سپتی سمی خونریزی دهنده از مهم ترین بیماری های ویروس آزادماهیان می باشد. ژنوم این ویروس شامل شش ژن می باشد که مهم ترین آن ژن g (گلیکوپروتئین) است و در ایمنی زایی علیه این ویروس نقش دارد. هدف از این مطالعه شناسایی ویروس سپتی سمی خونریزی دهنده قزل آلای رنگین کمان، مطالعه فیلوژنی و کلونینگ ژن g ویروس در وکتور ptz57r/t بود. پس از تشخیص ویروس سپتی سمی خونریزی دهنده به روش rt-pcr و کلونیگ ژن g داخل پلاسمید ptz57r/t، پلاسمید نوترکیب سنتزشده به باکتری پذیرا (e.coli) منتقل گردید. از کلونی های سفید دربردارنده وکتور نوترکیب جهت استخراج پلاسمید استفاده شد. اندازه ژن g ویروس سپتی سمی هموراژیک bp 1523 می باشد که در این پژوهش جهت تایید کلونینگ از روش کلونی pcrو تعیین توالی اسفاده شد. بررسی های حاصل از این مطالعه نشان داد که ژن g با موفقیت در وکتور  ptz57r/t کلون گردیده است و می توان ازآن جهت بیان گلیکوپروتئین ویروس در وکتورهای بیانی به منظور تولید پروتئین استفاده کرد. نتایج حاصل شده از تعیین توالی ژن g نیز نشان داد که ویروس شناسایی شده در این مطالعه متعلق به ژنوتیپ ia2  بوده است. مطالعه حاضر نخستین تحقیقی است که در کشور به منظور کلونینگ ژن gویروس سپتی سمی خونریزی دهنده در وکتورهای پلاسمیدی انجام شده است.

Diagnosis, Phylogenetic analysis and cloning of G glycoprotein gene of viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) detected in Rainbow trout (Onchorhynchus mykiss)

Viral hemorrhagic septicemia is one of the most important virus disease in salmonid fishes. The genome of the virus consists of six genes, the most important of which is the G glycoprotein gene, which plays a role in immunization against the virus. The aim of this study was detection of viral hemorrhagic septicemia virus in Rainbow trout, phylogenic study and cloning of the G gene of virus in pTZ57r/t vector. Methods: After detecting of viral hemorrhagic septicemia virus by RTPC, cloning of G gene in pTZ57r/t plasmid, the recombinant plasmid was transformed to the competent bacterium (E. coli). White clonies containing recombinant vector were used to extract the plasmid. The size of the G gene of viral hemorrhagic septicemia virus was 1523 bp. In this study, colony PCR method and sequencing were used to confirm the cloning. Results: The results of this study showed that G gene has been cloned successfully in pTZ57r/t vector and can be used to express the glycoprotein of the virus in expression vectors for protein production. The results of sequencing of G gene also showed that the virus identified in this study belonged to genotype Ia2.