بررسی خصوصات ژنوتیپی آنزیم هیستامیناز گیاه خلر (Lathyrus Sativus) در راستای اهداف درمانی و تشخیصی

هیستامین یک آمین زیستی است که در بیماری‌های مختلف مانند رینیت آلرژیک، التهاب ملتحمه، کهیر و درماتیت آتوپیک و هم چنین در ایجاد بیماری‌های  آنافیلاکسی قلبی و آسم‌های آلرژیک نقش دارد. گیاهان دارویی از دیر باز در درمان بیماری‌های مختلف استفاده ‌شده‌ اند. به دلیل کاربردهای وسیع آنزیم هیستامیناز در درمان بیماری‌ های با منشا هیستامین در انسان و دام، در این مطالعه شناسایی و هم سان سازی ژن آنزیم هیستامیناز (dao) از گیاه خُلر (lathyrus sativus) بومی صورت گرفت. به این منظور استخراج mrna از جوانه خلر بومی استان فارس و به دنبال آن سنتز cdna به منظور تکثیر ژن هیستامیناز با پرایمرهای طراحی شده انجام شد، سپس همسان سازی ژن پس از برش آنزیمی در ژن و وکتور pqe80l انجام گردید، در نهایت انتقال وکتور نوترکیب به باکتری escherichia coli سویه‌ xl1blue صورت گرفت. صحت کلونینگ نیز با هضم آنزیمی و توالی یابی تایید شد. پس از توالی یابی نوکلئوتیدی، ترادف mrna ژن مربوط به طول 1995جفت باز در بانک ژن امریکا به شماره دسترسی kr063661 ثبت گردید، توالی پروتئینی آن نیز در بانک ژن به شماره ale71304  ثبت شد. ارزیابی ساختار سه بعدی آنزیم هیستامیناز بومی و مطالعه فیلوژنتیک آن نیز براساس ترادف‌های شناخته شده در این مطالعه انجام گرفت که نشان‌ دهنده بیش ترین شباهت ژنتیکی (94 %) و پروتئینی (% 96) به گونه‌ نخود (pisium sativum) است. پلاسمید نوترکیب تولید شده در آینده می‌ تواند در سیستم‌های بیانی استفاده شود و منجر به تولید انبوه آنزیم برای استفاده از خصوصیات درمانی این آنزیم منحصر به فرد گردد.

Genotype characterization of histaminase enzyme from grass pea (Lathyrus sativus) for treatment and diagnosis purposes

Histamine is a biological amine that plays a role in various diseases such as allergic rhinitis, conjunctivitis, urticaria and atopic dermatitis, as well as in the development of anaphylaxis and allergic asthma. Medicinal plants have long been used in the treatment of different diseases. Due to the extensive use of this enzyme in the treatment of histamineinduced diseases in humans and animals, this study aimed at cloning and characterization of the DAO gene in this Iranian native grass pea plant (Lathyrus sativus). For this purpose, the extraction of mRNA from native seedling of Fars province done and followed by cDNA synthesis for the amplification of the histaminease gene using primers designed. Then, the cloning of the gene performed after double digestion of the gene and the pQE80L vector. Finally, the recombinant vector transferred to Escherichia colistrain XL1Blue. Cloning accuracy was confirmed by enzymatic digestion and sequencing. After nucleotide sequencing, the corresponding mRNA gene with 1995 bp length was deposited in GenBank database under accession number KR063661. Also, its protein sequence was registered in the GenBank under accession number ALE71304. The evaluation of the threedimensional structure of the native histaminase enzyme and its phylogenetic study was performed based on the wellknown sequences in this study Which showed the highest genetic (94%) and protein (96%) similarity to chickpea (Pisium sativum). The recombinant plasmid was produced in the future can be used in expression systems to produce mass enzymes for the therapeutic properties of this unique enzyme.