ساخت سازه Rna سنجاق سری القاءکننده خاموشی ژن و بررسی مقاومت ناشی از آن در برابر ویروس برگ بادبزنی مو Gflv

استفاده از ارقام مقاوم گیاهی بهترین راه برای کنترل عوامل ویروسی می باشد. القاء مقاومت به واسطه خاموشیrna یک روش خوب برای ایجاد ارقام مقاوم به ویروس ها می باشد. ویروس برگ بادبزنی مو (gflvgrapevine fanleaf virus) عامل یکی از مخرب ترین بیماری های ویروسی مو در سراسر دنیا است. به منظور بررسی امکان ایجاد مقاومت به gflv مو با استفاده از سیستم القاء مقاومت به واسطه rna، از توالی نوکلئوتیدی دو ژن این ویروس برای ساخت سازه سنجاق سری استفاده شد که در آن قطعه ای از هر ژن به طور جداگانه در جهت سنس و آنتی سنس در دو طرف یک ناحیه اینترونی و در مقابل 35scamv در پلاسمید pga482g قرار گرفت. جهت تراریختیگیاهان nicotiana benthamiana از سیستم agrobacterium tumefaciens استفاده شد. پس از تایید انتقال ژن، گیاهان تراریخت به منظور ارزیابی مقاومت نسبت به gflv، مایه زنی مکانیکی شدند. 10 روز پس از مایه زنی ویروس سه نوع واکنش مقاومت، حساسیت و تاخیر در بروز علایم در گیاهان مایه زنی شده مشاهده شد. آزمون الایزا نیز عدم حضور ویروس را در گیاهان مقاوم تراریخت تایید کرد. در این گیاهان حتی یک ماه پس از مایه زنی، هیچ گونه علایم ویروسی مشاهده نشد. درحالی که گیاهان تراریختی که حضور ویروس در آن ها با آزمون الایزا ردیابی شد، علایم موزاییک را یک هفته پس از مایه زنی و مشابه تیپ وحشی گیاهان مایه زنی شده با gflv نشان دادند. نتایج این تحقیق نشان داد که سازه به کار رفته برای القاء مقاومت کارایی بالایی داشته و می توان از آن برای ایجاد مقاومت در ارقام مختلف مو نسبت به gflv استفاده کرد.

Construction of hairpin RNA structure inducing RNA silencing and evaluation of resistance derived by it against Grapevine Fanleaf Virus

The most efficient approach to control virus agents is the use of the resistant plant varieties. The RNA silencingbased resistance is the best way to establish the resistant plants against viruses. Grapevine fanleaf virus (GFLV) is one of the most destructive viral diseases of grapevines worldwide. In order to investigate the possibility of the resistance induction against GFLV using RNAmediated induction of resistance, nucleotide sequence of two genes of GFLV was used to produce a hairpin construct. The construct was developed using intron and also the fragments in sense and antisense directions in front of 35S promoter in pGA482G. Agrobacterium tumefaciens was used to transform Nicotiana benthamiana plants. To evaluate resistance to GFLV after confirmation of transformation, the transgenic plants were mechanically inoculated with this virus. 10 days after virus inoculation, the inoculated plants showed various reactions including resistance, susceptibility and delay in symptom production. ELISA assay confirmed the absence of the virus in the resistant transgenic plants. No symptom was observed in these plants even a month after inoculation. The transgenic plants in which the virus was detected by ELISA reaction, mosaic symptom similar to that in wild type plants was appeared one week after inoculation. The results of this study showed that the developed construct containing a sequence of GFLV is efficient to establish the resistance to this virus and could be applied to produce the resistance in the different grape varieties.