epigenetic effects of bisphenol a on granulosa cells of mouse follicles during in vitro culture: an experimental study

Background: bisphenol a (bpa), a synthetic endocrine-disrupting chemical, is a reproductive toxicant. granulosa cells have significant roles in follicle development, and kit ligand (kitl) and anti-m uuml;llerian hormone (amh) are essential biomolecules produced by them during folliculogenesis.objective: due to the widespread use of bpa and its potential epigenetic effects, this study examined the impact of bpa on promoter methylation of amh and kitl genes in mouse granulosa cells.materials and methods: preantral follicles were isolated from ovaries of immature mice and cultured for eight days. then, follicles were treated with 50 and 100 mu;m of bpa, and 0.01% (v/v) ethanol for 24 and 72 hr. growth and degeneration of follicles and antrum formation were analyzed. the granulosa cells were isolated mechanically, and their extracted dna was treated with sodium bisulfite. the promoter regions of the amh and kitl were analyzed with pcr and sequencing.results: bpa did not change follicle survival and antrum formation significantly (p = 0.41). however, the culture in the presence of 100 mu;m bpa had an inhibitory effect on growth. before bpa treatment, the cpg of the kitl and amh promoters were unmethylated and partially methylated, respectively. while the percent of 5mc in the amh promoter reduced at 100 mu;m of bpa, it did not alter the kitl promoter methylation.conclusion: bpa at higher concentrations has an inhibitory effect on follicle growth. moreover, it seems that the epigenetic impact of bpa restricts to the demethylation of cpg sites.

اثرات اپی ژنتیکی بیسفنول A بر روی سلول های گرانولوزای فولیکول های موش در شرایط کشت آزمایشگاهی: یک مطالعه تجربی

مقدمه: بیسفنول A (BPA)، ترکیب شیمیایی مختل کننده اندوکراین، یک سم دستگاه تولیدمثل است. سلول های گرانولوزا وظایف مهمی در تکوین فولیکول دارند و لیگاند KIT (KITL) و آنتی مولرین هورمون (AMH) از مولکول های زیستی ضروری هستند که توسط آن ها طی فولیکوژنز تولید می شوند.هدف: به دلیل استفاده گسترده از BPA و اثرات اپی ژنتیکی بالقوه آن، این مطالعه به بررسی تأثیر BPA روی متیلاسیون پروموتر ژن های amh و kitl در سلول های گرانولوزای موش پرداخت.مواد و روش ها: فولیکول های پره آنترال از تخمدان های موش های نابالغ جدا شدند و برای هشت روز کشت داده شدند. سپس، فولیکول ها باBPA 50 و 100 میکرومولار و %01/0 (v/v) اتانول برای 24 و 72 ساعت تیمار شدند. رشد و دژنراسیون فولیکول ها و تشکیل حفره آنتروم در آن ها بررسی شد. سلول های گرانولوزا به صورت مکانیکی جدا شدند و DNA استخراج شده از آن ها با بی سولفیت سدیم تیمار شد. نواحی پروموتری ژن های amh و kitl با PCR و تعیین توالی مطالعه شدند.نتایج: BPA منجر به تغییر معناداری در بقاء فولیکول و تشکیل آنتروم نشد (41/0 p =). با این حال، کشت در حضور 100 میکرومولار BPA، اثر مهاری روی رشد فولیکول ها داشت. پیش از تیمار با BPA، CpG پروموترهای kitl و amh به ترتیب، به حالت غیرمتیله و متیلاسیون جزئی بودند. درصد 5متیل سیتوزین در پروموتر amh در غلظت 100 میکرومولار BPA کاهش یافت، در حالی که این مقدار از BPA تأثیری بر متیلاسیون پروموتر kitl نداشت.نتیجه گیری: BPA در غلظت های بالاتر تأثیر مهاری بر رشد فولیکول دارد. بعلاوه، به نظر می رسد که اثر اپی ژنتیکی BPA به دمتیلاسیون جایگاه های CpG محدود می شود.