derivation of new human embryonic stem cell lines (yazd1-3) and their vitrification using cryotech and cryowin tools: a lab resources report

Background: cell banking of initial outgrowths from newly derived human embryonic stem cells (hescs) requires an efficient freezing method. vitrification is used for the preservation of gametes and early embryos in assisted reproduction techniques (art). moreover, vitrification was applied for cryopreservation of hescs using open pulled straws.objective: to derive and characterize new hesc lines and then use cryotech and cryowin tools for their vitrification.materials and methods: human esc lines were generated in a microdrop culture system using mouse embryonic fibroblasts (mefs) as the feeder layer; this was later scaled up using both mefs and yazd human foreskin fibroblasts batch 8 (yhff#8). to bank the cell lines, master cell banks of 100 cryotech and cryowin tools were produced for each individual cell line using the vitrification method; flasks of hesc lines were also cryopreserved using a conventional slowfreezing method.results: the pluripotency of cell lines was assessed by their expression of pluripotencyassociated genes (oct4/pou5f1, nanog, and sox2) and markers such as ssea4, tra160, and tra249. their in vitro capacity to differentiate into germ layers and germ cells using embryoid body (eb) formation and monolayer culture was assessed by screening the expression of differentiationassociated genes. the chromosomal constitution of each hesc line was assessed by gbanding karyotyping.conclusion: cryotech and cryowin tools used to vitrify new hescs at an early stage of derivation is an efficient method of preserving hescs.

تولید لاین های جدید سلول های بنیادی رویانی انسانی (یزد 1-3) و انجماد شیشه ای آنها با استفاده از ابزار کرایوتک و کرایووین: یک گزارش از منابع آزمایشگاهی

مقدمه: فراهم کردن بانک سلولی در مراحل اولیه تکثیر سلول های بنیادی رویانی انسانی نیازمند یک روش انجماد سلولی بهینه می باشد. انجماد شیشه ای به عنوان یک روش بهینه در حفظ و ذخیره سلول های زایا و رویان در روش های کمک باروری مورد استفاده قرار می گیرد. همچنین انجماد شیشه ای با استفاده از نی های کشیده شده برای حفظ سلول های بنیادی رویانی انسانی نیز استفاده شده است.هدف: تولید و شناسایی لاین های جدید سلول های بنیادی رویانی انسانی و انجماد شیشه ای آنها با استفاده از ابزار کرایوتک و کرایووین.مواد و روش ها: با استفاده از روش کشت در قطره های درمقیاس میکرو، لاین های جدید سلول های بنیادی رویانی انسانی بر روی لایه تغذیه کننده متشکل از سلول های فیبروبلاست جنینی موشی تولید شدند، که بعدا بر روی دو نوع لایه تغذیه کننده موشی و انسانی (سلول های فیبروبلاست جنینی موشی و سلول های فیبروبلاست پوست ختنه انسانی) تکثیر پیدا کردند. برای تهیه بانک سلولی اصلی برای هر لاین سلولی 100 عدد از ابزار کرایوتک و کرایووین جهت انجماد شیشه ای استفاده شد. همچنین فلاسک های حاصل از تکثیر سلول های بنیادی رویانی انسانی یزد با روش قدیمی انجماد آهسته ذخیره شدند.نتایج: پرتوانی لاین های سلولی یزد با استفاده از بررسی بیان ژن های مرتبط با پرتوانی و شناساگرهای اختصاصی مورد ارزیابی قرار گرفت. توانایی تمایزی سلول ها با استفاده از روش تشکیل اجسام شبه رویانی و همچنین روش کشت تک لایه و بررسی بیان ژن های تمایزی مربوط به سه لایه جنینی و سلول های زایا در سلول های تمایز یافته مورد ارزیابی قرار گرفت. جهت بررسی محتوای کروموزومی سلول ها از روش کاریوتایپ استفاده شد.نتیجه گیری: ابزار کرایوتک و کرایووین مورد استفاده قرار گرفته جهت انجماد شیشه ای در مراحل ابتدایی تولید لاین های جدید سلول های بنیادی رویانی انسانی ابزار مناسبی برای ذخیره این سلول ها می باشند.