بررسی اثر سمیّت سلولی و آپوپتوزی لیگوستیلید (z-ligustilide) بر سلول‌های سرطان پستان mcf-7 و سلول‌های طبیعی فیبروبلاست انسانی hdf1bom با استفاده از آزمون‌های mtt و annexin

زمینه و هدف: سرطان پستان به ‌منزله‌‌ی یکی از شایع‌ترین انواع سرطان و دومین علت شایع مرگ ناشی از سرطان در زنان است. در مطالعه حاضر، اثر لیگوستیلید (ماده موثر کلوس) بر روی رده‌‌ی سلول‌های سرطان پستان mcf7 در مقایسه با رده‌‌ی سلول‌های طبیعی فیبروبلاست انسانی hdf1bom مورد بررسی و ارزیابی قرار گرفت.روش بررسی: سلول‌های رده‌‌ی mcf7 و hdf1bom پس از کشت، با غلظت‌های مختلف لیگوستیلید (z)3butylidene4,5dihydrophthalide (zligustilide) (0، 50، 100، 150 و 200 میلی‌گرم/ میلی‌لیتر) به مدت 48 و 72 ساعت تیمار شدند. سپس توانایی زیستی با استفاده از دستگاه الایزا ریدر با روش رنگ‌‌سنجی mtt و میزان وقوع آپوپتوز با استفاده از دستگاه فلوسیتومتری و کیت انکسینپروپیدیوم یدید (annexinpi) در دو زمان بررسی گردید. تحلیل آماری با استفاده از نرم‌‌افزارهای spss و flowjo و آزمون‌‌های anova و huynhfeldt انجام شد.یافته‌‌ها: نتایج آزمون mtt برای رده سلولی mcf7 کاهش درصد توانایی زیستی در همه غلظت‌ها را نشان داد(در تیمار 48 ساعته؛ از 70/60% (mg/ml 50) به 6/80 % (mg/ml 200)، در تیمار 72 ساعته؛ از 61/95% (mg/ml 50) به 5/84% (mg/ml 200)). همچنین نتایج آزمون annexin نشان داد که میزان القای آپوپتوز وابسته به زمان و غلظت نبوده و در بیشتر گروه‌ها افزایش‌یافته است. بیشترین درصد آپوپتوز در تیمار 48 ساعته؛ 98/3% (mg/ml 50) و در تیمار 72 ساعته؛ 97/4% (mg/ml 100) بود. نتایج آزمون mtt برای رده سلولی hdf1bom کاهش درصد توانایی زیستی در هر دو زمان نسبت به گروه کنترل را نشان داد(در تیمار 48 ساعته؛ از 97/24% (mg/ml 50) به 5/97% (mg/ml 200 )، در تیمار 72 ساعته؛ از 90/93% (mg/ml 50) به 5/26% (mg/ml 200)). همچنین طبق نتایج آزمون annexin سلول‌هایی که در مرحله ابتدایی آپوپتوز قرار دارند درصد بیشتری را نشان می‌دهد(در تیمار 48 ساعته؛ 4/21% (mg/ml 150)، در تیمار 72 ساعته؛ 1/67% (mg/ml 200)). لیگوستیلید سمیّت سلولی قابل‌توجهی را در سلول‌های hdf1bom نشان نداد.نتیجه گیری: با توجه به اینکه لیگوستیلید از طریق القای آپوپتوز اثر مهاری بر رشد، تکثیر و تهاجم سلول‌های سرطانی دارد؛ به نظر می‌رسد آن می‌‌تواند برای کاهش تکثیر سلولی در سرطان پستان استفاده شود.

The Cytotoxicity and Pro-Apoptotic Effect of Ligustilide (Z-Ligustilide) on MCF-7 Breast Cancer Cells and HDF1BOM Human Fibroblast Cells by Using MTT and Annexin Tests

Background and Aim: Breast cancer is one of the most common types of cancer and the second leading cause of cancer death in women. The effect of ligustilide isolated from the Kelussia on MCF7 breast cancer cell line compared with human fibroblast cell line (HDF1BOM) was evaluated in the present study.Materials and Methods: MCF7 and HDF1BOM cell lines were treated for 48 and 72 hours with different concentrations (0, 50, 100, 150 and 200 mg/ml) of Zligustilide ((ligustilide (Z)3butylidene4,5dihydrophthalide)). Then, bioavailability was analyzed by ELISA reader using MTT kit and Apoptosis was assessed by flow cytometry using an Annexin VFITC/PI kit in two times. Statistical analysis was accomplished by ANOVA and HuynhFeldt tests using SPSS and FlowJo software. Results: The results of MTT test showed reduce bioavailability of MCF7 cell line in all concentrations (from 70.60% in 50 mg/ml to 6.80% in 200 mg/ml (for 48 h of treatment), from 61.95% in 50 mg/ml to 5.84% in 200 mg/ml (for 72 h of treatment)). Also, the results of the Annexin test showed that the induction of apoptosis is not time and concentration dependent manner, and it had increased in most groups. highest percentage of apoptosis were; 98.3% in 50 mg/ml (for 48 h of treatment), and 97.4 % in 100 mg/ml (for 72 h of treatment). The results of MTT test showed reduce bioavailability of HDF1BOM cell line in both times compared to the control group (from 97.24% in 50 mg/ml to 5.97% in 200 mg/ml (for 48 h of treatment), from 90.93% in 50 mg/ml to 5.26% in 200 mg/ml (for 72 h of treatment)). Also, according to the results of Annexin, early apoptotic cells show a higher percentage (4.21% in 150 mg/ml (for 48 h of treatment), 1.67% in 200 mg/ml (for 72 h of treatment)). Ligustilide did not show considerable cytotoxicity in HDF1BOM cells.Conclusion: Due to the fact that ligustilide has an inhibitory effect on the growth, proliferation and invasion of cancer cells by inducting apoptosis, it seems that ligustilide can be used to reduce cell proliferation of breast cancer.