طراحی و ساخت سازه ی E2-Flic با استفاده از ژن Flic باکتری سالمونلا انتریکا و ژن E2 ویروس هپاتیت C و بیان آن در سیستم یوکاریوتی

زمینه و هدف: امروزه یکی از راهکارهای طراحی واکسن، تهیه فیوژن پروتئینهای حاصل از عوامل ایمونوژن عامل عفونی با پروتئین ادجوانت می باشد. مطالعه ی حاضر برای طراحی و ساخت سازه ی e2flic به عنوان کاندید واکسن با استفاده از ژن flic باکتری سالمونلا انتریکا و ژن e2 ویروس هپاتیت c و بیان آن در سیستم یوکاریوتی اجرا گردید.روش بررسی: در این مطالعه که به صورت یک تحقیق بنیادیکاربردی است، برای ساخت سازه ی e2-flic، دو قطعه ی e2 و flic از پلاسمیدهای pbluescript-e2 و pbluescript-flic به روش pcr تکثیر شدند. برای تهیه پلاسمید نوترکیب pcdnae2flic، ابتدا پلاسمید (+)pcdna3.1 از سلولهای dh5 α استخراج و قطعه ی e2 در آن الحاق گردید. با تهیه پلاسمید نوترکیب pcdna3.1-e2، در مرحله بعد الحاق قطعه ی flic در آن انجام شد. برای ارزیابی بیان سازه ی e2flic، سازه در پلاسمید pegfp-n3 الحاق گردید و ترانسفکشن پلاسمید نوترکیب pegfpn3-e2-flic به سلولهای cos7 انجام شد تا بیان پروتئین در زیر میکروسکوپ فلورسنت با مشاهده ی نور سبز ارزیابی شود.یافته ها: ظهور نور فلورسان سبز در سلولهای مورد مطالعه توسط میکروسکوپ فلورسنت، بیشترین بیان از ساختار e2-flic را 48 ساعت پس از ترانسفکشن نشان داد. به علاوه تهیه پلاسمید نوترکیب pcdna-e2-flic با روش pcr، برش آنزیمی و توالی یابی تایید شد.نتیجه گیری: یافته های ما پیشنهاد می کنند که فیوژن پروتئین e2-flic به طور موثری بیان شده و ممکن است از لحاظ آنتی ژنیسیته بتواند همانند پروتئین e2 ویروس آلوده کننده، پس از ایمیونیزاسیون موش ها با pcdnae2-flic به عنوان کاندید واکسن در تحریک سیستم ایمنی عمل کند.