specific chicken egg yolk antibodies against enterotoxigenic escherichia coli k99 in serum and egg yolk of immunized laying hens

Enterotoxigenic escherichia coli k99 is one of the dominant pathogens associated with diarrhea of calves. immunoglobulin y (igy), has been used as an inexpensive alternative to antibiotics for the prevention and therapy of several bacterial infections. the study aimed to prepare igy antibodies against e. coli k99 and to investigate its in vitro effectiveness. e. coli k99 was grown in the tryptic soy broth, and the bacterial suspension was inactivated by formaldehyde. thirty white leghorn hens allocated to control and treatment groups. 1 ml of the prepared bacterial suspension or sterilized physiological serum emulsified with freund’s complete adjuvant was injected at two weeks interval to the hens in treated or control group. the total igy was purified with polyethylene glycol (peg) 6000 from egg yolks (ey). purified igy fractions were processed for protein concentrations by bradford assay. sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis was used to analyze purified igy fractions. an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (elisa) method was used to measure the specific igy titers in serum and ey. the ability of non-specific and anti-e. coli k99 igy antibody at 100 and 200 mg/ml concentration was evaluated by growth inhibition assay in vitro. according to the elisa data, total igy concentration in serum and ey of control was relatively constant, while increased in the treatment group (p<0.05). the level of binding activity of specific igy in serum and ey increased in immunized hens (p<0.05). specific igy had the highest activity for bacterial inhibiting growth at the level of 200 mg/ml. these results suggested the prepared igy antibodies could inhibit e. coli k99 in vitro growth.

آنتی‌بادی زرده تخم مرغ علیه اشریشیا ‌کلی انتروتوکسیژنیک K99 در سرم و زرده تخم مرغ مرغان تخمگذار ایمن شده

ای. کلی انتروتوکسیژنیک K99  به عنوان یکی از مهم‌ترین عوامل بیماری‌زای مرتبط با اسهال در گوساله‌های نوزاد شناخته می‌شود. ایمنوگلوبین‌های زرده تخم مرغ (IgY) به عنوان یک جایگزین ارزان برای آنتی‌بیوتیک‌ها جهت پیشگیری و درمان از عفونت‌های باکتریایی و ویروسی استفاده شده است. هدف از این مطالعه، تهیه IgY اختصاصی علیه ای. کلی انتروتوکسیژنیک K99 و بررسی اثربخشی آن در شرایط آزمایشگاهی بود. به این منظور ای. کلی K99 در محیط TSB کشت داده شد و باکتری توسط فرمالدهید غیر فعال شد. 30 قطعه مرغ لگهورن سفید به دو گروه مساوی کنترل و تیمار تقسیم شدند. یک میلی‌لیتر از سوسپانسیون باکتری یا سرم فیزیولوژیک استریل تهیه شد و با ادجوانت کامل فروند مخلوط شد. سوسپانسیون بدست آمده به مدت دوهفته در عضله سینه به ترتیب در مرغان گروه تیمار و کنترل تزریق شد. نمونه خون هر دوهفته یکبار از ورید بال مرغان گرفته شد و تخم مرغ‌ها به صورت روزانه جمع‌آوری شد. کل IgY با استفاده از پلی اتیلن گلایکول 6000 در زرده تخم مرغ مرغان ایمن شده خالص‌سازی شد. مقدار پروتئین در IgY خالص بوسیله روش بردفورد اندازه‌گیری شد. SDSPAGE جهت تجزیه و تحلیل زنجیره‌های IgY خالص مورد استفاده قرار گرفت. تیتر IgY اختصاصی در سرم و زرده تخم مرغ به وسیله روش الایزای غیرمستقیم اندازه‌گیری شد. آزمون مهار رشد در شرایط آزمایشگاهی برای IgY اختصاصی و غیر اختصاصی در غلظت‌های 100 و 200 میلی‌گرم در میلی‌لیتر ارزیابی شد. با توجه به نتایج بدست آمده از الیزای غیر مستقیم، غلظت کل IgY در سرم و زرده تخم مرغ در گروه کنترل نسبتا ثابت بود در حالیکه در گروه تیمار به طور معنی‌داری افزایش یافت (05/0>P). سطح فعالیت باند کنندگی IgY اختصاصی در سرم و زرده تخم مرغ در مرغان ایمن شده نسبت به گروه کنترل افزایش یافت (0.05>P). IgY اختصاصی برای مهار رشد باکتری در غلظت 200 میلی‌گرم در ملی‌لیتر بیشترین مقدار بود. این نتایج می‌تواند نشان دهد که IgY تهیه شده علیه ای. کلی K99 می‌تواند از رشد این باکتری در شرایط آزمایشگاهی جلوگیری کند.