effect of antioxidant d-aspartic acid and thawing rate on the freeze-thawing process of ram semen

The study was conducted to determine the influence of d-aspartic acid (d-asp) as antioxidant supplement and thawing rates on ram sperm motility, membrane integrity, abnormality, viability, mitochondria activity, malondialdehyde and antioxidant activities, and total antioxidant capacity after freezing-thawing process. semen samples from five mature rams (3-4 years old) were diluted with extenders (1.5% soybean lecithin, 7% glycerol) containing no supplements (control) and d-asp (5, 10, and 15 mg/l) and cryopreserved. fro-zen straws were thawed at water bath temperatures at 37 °c for 30s and at 60 °c for 6s. addition of 10 mg/l of d-asp improved significantly progressive motility, average path velocity, and straight-line velocity percentages after freeze-thaw (p<0.05). plasma membrane integrity, mitochondria activity, viability, total antioxidant capacity, and glutathione peroxidase were higher in group receiving 10 mg/l in comparison to other treatments (p<0.05). meanwhile, total abnormality significantly decreased at this concentration (10 mg/l) in comparison to the level of 15 mg/l and control group (p<0.05). our results revealed that malondialdehyde level was lower in group receiving 10 mg/l d-asp compared to other treatments (p<0.05). there were no significant interactions between concentrations of d-asp and thawing proto-cols for any semen samples. also, significant improvement in sperm viability and mitochondria activity were observed at 37 °c to 30 s thawing method (p<0.05). in overall, results of the present study demon-strate that addition of d-asp at level of 10 mg/l have beneficial effect on quality of post-thawed ram se-men cryopreserved in an extender. therefore, this antioxidant in the suitable dose can be recommended as an additional component of ram freezing extender. the 60 °c to 6s thawing procedure is not an appropriate replacement for 37 °c to 30 s.

تأثیر آنتی‌اکسیدان Dآسپارتیک اسید و سرعت یخ‌گشایی بر فرآیند انجمادیخ‌گشایی منی قوچ

این مطالعه به منظور تعیین اثر Dآسپارتیک اسید (DAsp) به عنوان مکمل آنتی­اکسیدانی و سرعت یخ­گشایی بر تحرک، یکپارچگی غشاء، ناهنجاری، زنده­مانی، فعالیت میتوکندریایی، میزان مالون ­دی آلدهید، فعالیت آنتی­اکسیدانی و ظرفیت کل آنتی­اکسیدانی بعد از فرآیند انجماد–یخ­گشایی اسپرم قوچ انجام گرفت. نمونه­های منی از پنج رأس قوچ بالغ (43 ساله) گرفته شده و با استفاده از رقیق­کننده (5/1 درصد لستین سویا و 7 درصد گلیسرول)، بدون آنتی اکسیدان (شاهد) و دارای DAsp (5، 10 و  15 میلی­گرم در لیتر) محافظت انجمادی شدند. پایوت­های منجمد شده با استفاده از حمام آب گرم با دمای °C 37 در مدت 30 ثانیه و در دمای °C 60  به مدت 6 ثانیه یخ­گشایی شدند. نتایج نشان داد که افزودن 10 میلی­گرم بر لیتر از DAsp باعث بهبود معنی­دار درصد حرکت پیش­رونده، میانگین مسیر طی شده (VAP) و سرعت در خط مستقیم (VSL) اسپرم­ها بعد از فرآیند انجمادیخ­گشایی شد (05/0>P). میزان یکپارچگی غشاء پلاسمایی، فعالیت میتوکندریایی، زنده­مانی، ظرفیت کل آنتی­­اکسیدانی و فعالیت گلوتاتیون پراکسیداز در نمونه­های دریافت کننده10 میلی­گرم در لیتر DAsp نسبت به دیگر تیمارها بالاتر بود  (05/0>P). در همین حال، ناهنجاری کل در نمونه­های دریافت کننده 10 میلی­گرم در لیتر DAsp نسبت به 15 میلی­گرم در لیتر و یا گروه کنترل کاهش معنی­داری داشت (05/0>P). نتایج این آزمایش نشان داد که سطح مالون دی آلدهید در گروه دریافت کننده 10 میلی­گرم در لیتر DAsp نسبت به دیگر تیمارها کمتر بود (05/0>P). اثر متقابل معنی­داری بین غلظت­های مختلف DAsp و متدهای مختلف ذوب منی منجمد مشاهده نشد. استفاده از روش ذوب منی در دمای °C 37 و در مدت 30 ثانیه باعث بهبود معنی­دار زنده­مانی اسپرم و فعالیت میتوکندریایی شد (05/0>P). به طورکلی، نتایج مطالعه حاضر نشان داد که افزودن 10 میلی­گرم در لیتر DAsp اثرات مفیدی بر روی کیفیت منی قوچ بعد از انجماد و یخ­گشایی می­شود. بنابراین افزودن این آنتی اکسیدان در مقادیر مناسب به عنوان یکی از اجزای رقیق­کننده­های انجمادی منی قوچ قابل توصیه می­باشد. استفاده از پروتکل دمای ذوب °C 60 به مدت 6 ثانیه نمی­تواند جایگزین مطلوبی با پروتکل ذوب منی منجمد در دمای °C 37  و در مدت 30 ثانیه باشد.