جدا‌سازی و همسانه‌سازی ژن منگنزپراکسیداز (mnp) از قارچ صدفی خوراکی

در قارچ‌ صدفی خوراکی (pleurotus ostreatus) آنزیم‌های مختلفی از ابتدای رشد میسلیومی تا انتهای دوره‌ی میوه‌دهی، تجزیه ترکیبات لیگنینی را در محیط کشت بر عهده دارند. چوب، بقایای گیاهی و بیشتر ضایعات گیاهی دیگر در طبیعت تحت عنوان ترکیبات لیگنوسلولزی نامیده می‌شوند. لیگنوسلولز عمدتاً از سلولز، همی‌سلولز و لیگنین تشکیل می‌شود. آنزیم منگنزپراکسیداز (ec:1:11:1:13)، یکی از عمومی‌ترین پراکسیدازهای تخریب‌کننده لیگنین است که توسط اکثر قارچ‌های تجزیه‌کننده چوب و نیز بسیاری از قارچ‌های تجزیه‌کننده کمپوست تولید می‌شود. در این پژوهش به‌منظور جداسازی cdna ی ژن mnp قارچ صدفی خوراکی (p. ostreatus var. florida)، استخراج rnaو سپس سنتز cdna انجام و بر اساس توالی ژن mnp و با استفاده از نرم‌افزار primer premier (v. 5.0) آغازگرها طراحی گردید و با واکنش زنجیره ای پلیمراز تکثیر شد. قطعه تکثیر شده در ناقل ptg19-t وارد شد و با استفاده از توالی‌یابی تایید شد. در ادامه، ژن mnp در ناقل p13h88 همسانه‌سازی گردید. سپس با روش یخ-ذوب به ecoli (سویه‌یdh5? ) منتقل و تایید حضور آن در باکتری با روش هضم آنزیمی انجام گرفت. نتایج نشان داد که ژن mnp در ناقل p13h88 همسانه‌سازی شده است. پلاسمید نوترکیب بدست آمده با نام p13h88-fm نامگذاری شد.