جداسازی، بیان ژن و تولید پروتیین افکتور ptha باکتری xanthomonas citri subsp citri عامل بیماری شانکر مرکبات

بیماری شانکر باکتریایی مرکبات از جمله مهمترین بیماری های باغات لیموی مکزیکی در جنوب کشور می باشد که توسط باکتری xanthomonas citri subsp. citri (xcc) ایجاد می‌شود. پروتیین ptha باکتری عامل شانکر مرکبات، به عنوان پروتیین افکتور، نقش اساسی در فرایند بیماری زایی دارد و لذا غیر فعال سازی آن با استفاده از آنتی بادی می تواند منجر به ایجاد مقاومت بر علیه بیماری شود. در این تحقیق جداسازی و بیان ژن ptha و خالص سازی پروتیین حاصل از آن صورت پذیرفته است. برای این منظور با استفاده از منابع اطلاعاتی بانک ژن، آغازگرهای اختصاصی برای جداسازی ژن ptha طراحی شد و سپس قطعه ژنی مربوطه در ناقلptz57r/t همسانه سازی گردید. ژن مزبور سپس به صورت متصل به دنباله شش تایی هیستیدین در ناقل بیانی باکتریایی pet28a همسانه سازی گردیده و بیان آن به صورت نوترکیب در سویه bl21(de3) باکتری escherichia coli صورت پذیرفت. خالص سازی پروتیین نوترکیب ptha در شرایط طبیعی غیر واسرشتی و با استفاده از روش کروماتوگرافی تمایلی بر روی ستون نیکل صورت پذیرفت. صحت بیان پروتیین مذکور با روش های الکتروفورز پروتیین و وسترن بلاتینگ با استفاده از آنتی بادی های اختصاصی توالی شش تایی هیستیدین مورد بررسی و تایید قرار گرفت. پروتیین نوترکیب خالص بدست آمده می تواند به عنوان آنتی ژن برای تولید آنتی بادی های نوترکیب مونوکلونال مورد استفاده قرار گیرد.