کلونینگ ژن invg از باکتری سالمونلا انتریکا در حامل pet32a و بررسی بیان آن در میزبان bl21- de3

باکتری سالمونلا یکی از عوامل ایجاد بیماریهای عفونی و به عنوان یک بیماری مشترک در انسان و حیوانات، از لحاظ بهداشتی و اقتصادی دارای اهمیت فراوان است، که تا کنون واکسن برای آن تولید نشده است. ژن invg به سبب ساختاری و به عنوان یکی از ژن های اصلی تشکیل دهنده سیستم ترشحی نوعiii و همچنین قرار گرفتن در غشا باکتری، نقش مهمی را در اتصال اولیه باکتری به سلول میزبان دارد. هدف اصلی از پژوهش حاضر بیان پروتیین نوترکیب invg و معرفی آن به عنوان یک ادجوانت موثر جهت dna واکسن بود. در این پژوهش با طراحی آغازگر اختصاصی و استفاده از روش pcr، ژن invg باکتری سالمونلا تکثیر گردید. پس از تخلیص، ژن فوق در ناقل پلاسمیدی pet32a(+) جهت بیان کلون شد. سپس پلاسمیدی نوترکیب pet32a-invg وارد باکتری اشریشیاکلی سویه bl21- de3 گردید. به منظور تولید پروتیین نوترکیب در سیستم بیانی، باکتری حاوی پلاسمید بیانی و ژن هدف (invg) با استفاده از iptg القا شد. نتایج توالی یابی نشان داد که توالی ژن تکثیر شده در حامل بیانی pet32a کلون شده با ترادف ثبت شده برای ژن invg در بانک ژن یکسان بود. تولید پروتیین نوترکیب با القا iptg به میزبان حاوی پلاسمید pet32a -invg با موفقیت انجام گرفت. تایید بیان ژن invg در این سیستم بیانی، توسط آنالیز sds-page و دات بلاتینگ انجام گردید. پژوهش حاضر نشان داد تولید پروتیین نوترکیب invg در میزبان اشریشیاکلی امکان پذیر است و پروتیین تولید شده، وزنی در حدود 81 کیلو دالتون دارد.