تراریخت سازی چغندرقند با ژن کیتیناز لوبیا و افزایش مقاومت به بیمارگر Alternaria alternata

بیماری های قارچی از عوامل عمده کاهش رشد و باروری چغندرقند در سراسر جهان به شمار می‌روند. بیان پروتیین های مرتبط با بیماری زایی نظیر کیتینازها، یکی از پاسخ های دفاعی گیاهان در مقابل بیمارگرهای قارچی به شمار می رود. آنزیم‌های کیتیناز از طریق تجزیه دیواره‌های سلولی قارچی، در افزایش مقاومت گیاهان در مقابل دامنه گسترده ای از قارچ های بیماری زا نقش قابل توجهی دارند. در این تحقیق از دو رقم دیپلویید چغندرقند، sbsi-02 و sbsi-04، جهت تراریختی با agrobacterium tumefaciens سویه lba4404 حاوی پلاسمیدpbi-bch حامل ژن کیتیناز (chi) تحت کنترل راه‌انداز camv 35s و ژن گزینشگر nptii استفاده شد. برگ‌های حاوی پایه جوانه به عنوان ریزنمونه در فرآیند تراریخت سازی به کار برده شدند. جوانه های سبز در محیط کشت ms حاوی غلظت های مختلف کانامایسین با موفقیت غربال شدند. آنالیز pcr با آغازگرهای اختصاصی ژن chi، حضور ژن هدف را در بیش از 50 درصد گیاهچه های مقاوم به کانامایسین تایید کرد. آنالیز لکه‌گذاری نقطه‌ای (dot blot) درج حداقل یک نسخه از ژن هدف را در ژنوم گیاهان تراریخته احتمالی تایید نمود. آنالیز وسترن بلات تجمع پروتیین کیتیناز را در گیاهان تراریخته آشکار نمود. آزمون‌های زیست سنجی با استفاده از قطعات جدا شده برگ و در سطح گیاه کامل، مقاومت افزایش یافته لاین‌های تراریخته t0 چغندرقند در برابر بیمارگر قارچی alternaria alternata را در مقایسه با گیاهان شاهد غیرتراریخته آشکار ساخت.