بیان پروتیین نوترکیب اینترفرون گاما در بذر گیاه توتون

از مهم ترین عوامل موثر بر افزایش تولید پروتیین نوترکیب در گیاه، بیان آن در بافت مناسب و نیز افزایش پایداری و تجمع پروتیین با استفاده از عوامل هدف گیری کننده به جایگاه های مناسب سلول است. در این تحقیق برای بیان اینترفرون گامای انسانی در بذر توتون و هدایت آن به شبکه آندوپلاسمی از پیشبرنده اختصاصی بذر (napin)، توالی کوزاک در انتهای '5 و توالی kdel در انتهای '3 ژن ifn? استفاده شد. ژن ifn? ابتدا در ناقل pgem®-t easy همسانه سازی و پس از تایید صحت آن با استفاده از روش pcr، هضم آنزیمی و توالی یابی، در ناقل بیانی گیاهی pbi121 زیر همسانه سازی گردید. ناقل نوترکیب pbi ifn? به سویه lba4404 اگرباکتریوم معرفی و این باکتری برای تراریختی ریزنمونه های برگی توتون استفاده شد. نوساقه های باززایی شده در محیط انتخابی حاوی کانامایسین گزینش شدند. آنالیز گیاهان تراریخت در سطح dna و مشاهده قطعه 432 جفت بازی ifn?)) و قطعه 795 جفت بازی (nptii) در واکنش pcr و هضم آنزیمی بیانگر انتقال سازه مدنظر به ژنوم گیاه بود. همچنین رونویسی از ژن ifn? با rt-pcr تایید شد. بررسی ها در سطح پروتیین با استفاده از sds-page بیان موفقیت آمیز ژن ifn? را نشان داد. نتایج حاصل نشان می دهد که بذور گیاهی پتانسیل بالایی برای تولید پروتیین های نوترکیب دارند.