تولید فرم نوترکیب ایزوفرم تیپ 1 متالوتیونین برنج (OsMTI-1b) در باکتری اشریشیاکلی و بررسی قابلیت اتصال آن به فلز نیکل

گیاهان به مکانیسم های سلولی مختلفی در مقابله با اثر سمی فلزات سنگین مجهز شده اند. یکی از مهم ترین این مکانیسم‌‌ها، تولید پروتیین‌ها و پپتیدهای متصل شونده به فلزات، مانند متالوتیونین‌ها (mt) می‌باشد. متالوتیونین‌ها، گروهی از پروتیین‌ها با وزن مولکولی کم و غنی از آمینواسیدهای سیستیین هستند که دارای ظرفیت بالای اتصال به فلزات می باشند. در این تحقیق توالی‌ کد کننده‌ی ایزوفرمosmti-1b از گیاه برنج، به عنوان گیاه مدل در بین تک لپه‌ای‌ها، در ناقل بیانی pet41a همسانه‌سازی و به میزبان بیانی e. coli سویه‌ی rosetta (de3) منتقل شد. پس از القا محیط کشت توسط iptg، میزان مناسبی از پروتیین های نوترکیب در فاز محلول تولید و با استفاده از روش کروماتوگرافی جذبی خالص سازی شد. سلول‌‌‌‌‌های باکتری بیان‌کننده‌ی پروتیین‌های نوترکیب در محیط lb حاوی نمک nicl2 رشد داده شدند و منحنی رشد آن‌ها در مقایسه با شاهد ترسیم شد. مقدار کاهش فلز نیکل در محیط کشت و تجمع آن‌ها در رسوب باکتریایی توسط دستگاه طیف سنجی پلاسمای جفت شده‌ی القایی (icp-aes) به دست آمد. بر اساس نتایج مشخص گردید بیان ایزوفرمosmti-1b از طریق افزایش تجمع درون سلولی فلز نیکل موجب افزایش تحمل باکتری e. coli به این فلز می گردد. همچنین، بررسی الگوی جذب نور و واکنش dtnb با پروتیین های انکوبه شده با فلز نیکل در شرایط این ویترو، تشکیل دستجات فلز/تیول در پروتیین نوترکیب gst-osmti-1b را اثبات نمود. یافته های پژوهش حاضر می تواند منعکس کننده نقش احتمالی ایزوفرمosmti-1b در تحمل گیاه برنج به تنش فلزات سنگین باشد.