بیان و خالص سازی پروتیین حرکتی ویروس موزاییک پیسک سبز خیار با استفاده از سامانه حامل ویروس گیاهی

به منظور تولید و خالص‌سازی پروتیین حرکتی ویروس موزاییک پیسک سبز خیار (cucumber green mosaic mottle virus, cgmmv)، از یک حامل ویروس گیاهی که از همسانه‌ی آلوده کننده ویروس موزاییک زرد کدو به دست آمده است، استفاده شد. قاب خواندنی رمز کننده پروتیین حرکتی ویروس (cgmmv mp) میان قاب‌های p1 و hc-pro در حامل zymv قرار داده شد. توانایی آلوده کنندگی حامل نوترکیب با مالیدن پلاسمید روی گیاه سلمه تره و بروز لکه های موضعی تایید شد. سپس یک لکه منفرد برای انتقال مکانیکی ویروس نوترکیب به کدو در مرحله دو برگی استفاده شد. پایداری بیان پروتیین نوترکیب با انتقال پی در پی ویروس نوترکیب از گیاهان مایه زنی شده به گیاه سالم و نیز در طول یک دوره‌ی 30 روزه پس از مایه زنی ارزیابی شد. برگ گیاهان مایه زنی شده به وسیله rt-pcr و آزمون وسترن بلات بررسی شد. پروتیین نوترکیب به روش رسوب در شیب غلظت سوکروز و سپس استخراج از ژل خالص سازی شد و از هر مرحله نمونه گیری به عمل آمد و با آزمون وسترن بلات و sds-page مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج به دست آمده نشان داد که دو هفته پس از مایه زنی 8/1 تا 2/2 گرم پروتیین نوترکیب از هر صد گرم برگ کدو قابل دستیابی است. همچنین حامل نوترکیب پس از 10 بار انتقال متوالی و پس از یک دوره 30 روزه پایدار بود. این پژوهش روشی سریع و آسان برای تولید فراوان پروتیین حرکتی ویروس موزاییک پیسک سبز خیار در گیاه ارایه می کند.