همسانه سازی پیشبر E8 گیاه گوجه فرنگی و بررسی بیان موقت با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن

جداسازی و بررسی خصوصیات پیشبرهای اختصاصی بافت میوه، برای دستورزی و بیان هدفمند پروتیین های نوترکیب در گیاهان از اهمیت زیادی برخوردار است. پیشبر e8 یک پیشبر اختصاصی بافت میوه گیاه گوجه فرنگی بوده که طول کامل آن kb 2/2 می باشد. در این پژوهش بخش هسته ای این پیشبر به طول kb 1/1 مورد استفاده قرار گرفت. با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و آنزیم pfu پلیمراز، قطعه مورد نظر از روی dna استخراج شده گوجه فرنگی تکثیر و همسانه سازی شد. پس از تعیین توالی و تایید نهایی، پیشبر e8 جایگزین پیشبر دایمی camv35s در ناقل دوگانه pbi121 گردید. پلاسمید نوترکیب با کمک شوک حرارتی به agrobacterium tumefaciens سویه lba4404 منتقل شد. با استفاده از روش اگرواینفیلتریشن بیان اختصاصی ژن gus در بافت های گیاه گوجه فرنگی مورد بررسی قرار گرفت. اگروباکتریوم حاوی ناقل دوگانه pbi121 به عنوان کنترل مورد استفاده قرار گرفت. نتایج حاصل نشان داد که ژن gus در میوه های گوجه فرنگی به طور اختصاصی بیان می شود. از این پیشبر فعال می توان برای بیان اختصاصی پروتیین های نوترکیب در میوه های گیاه گوجه فرنگی استفاده نمود.