جداسازی و کلونکردن دو ژن از خانواده Pr1 و ساخت پلاسمیدهای سهگانه حاوی سه گروه مختلف از ژنهای Pr، به منظور تولید گیاهان تراریخته مقاوم به بیماریهای قارچی

با توجه به میزان خسارت ناشی از بیماریهای قارچی، استفاده از تکنیکهای بیوتکنولوژی برای تولید گیاهان مقاوم، از اهمیت ویژهای برخوردار است. از آنجایی که بیان ترکیبی از پروتیینهای مربوط به بیماریزایی منجر به مقاومت چندژنی خواهد شد که از یک سو دوام مقاومت را به همراه داشته و از سویی دیگر باعث مقاومت به انواع گستردهای از گونههای بیماریزا میگردد، لذا این پژوهش با هدف جداسازی ژن و ساخت سازههای پلاسمیدی چندگانه، حاوی سه گروه مهم از پروتیینهای مربوط به بیماریزایی pr1، pr2 و pr3، انجام گردید. ابتدا دو ژن دارای ویژگیهای متفاوت از خانواده pr1، با طراحی پرایمرهای اختصاصی، از ژنوم گیاه توتون جداسازی گردیدند و پس از آنالیزهای مربوط به صحت جداسازی ژن، طی مراحلی تحت پیشبر 35s و پایانبر nos در پلاسمید دوگانه pbi121 کلونسازی شدند. در مرحله بعد، کلونسازی دو ژن ضدقارچی مهم دیگر، pr2 (b-1و3-گلوکاناز) و pr3 (کیتیناز)، تحت کنترل نواحی تنظیمی مستقل در ناحیه t-dnaی حامل مذکور، به دو صورت همسو و غیرهمسو به همراه pr1، طی چندین مرحله انجام شد. انتظار می رود که حاملهای سهگانه حاصل از این پژوهش، علاوه بر ایجاد مقاومت پایدار به طیف وسیعی از عوامل بیماریزای قارچی، دارای پتانسیل ایجاد مقاومت به باکتری و سایر تنشهای زنده و غیرزنده نیز باشند. در نهایت حاملهای مذکور را می توان برای انتقال ژن به گیاهان مختلف با روش اگروباکتریوم و تفنگ ژنی مورد استفاده قرار داد.