کلونینگ، بررسی خصوصیات ملکولی و پیش‌بینی بیان مجازی ژن فیتاز phyC از باسیلوس سابتیلیس

فیتاز آنزیمی است که اسید فایتیک را هیدرولیز و فسفر معدنی تولید می کند. یکی از منابع بیان کننده آنزیم فیتاز، باکتری ها هستند که در این میان جنس باسیلوس مهم‌ترین باکتری تولیدکننده فیتاز قلیایی مقاوم به حرارت می باشد. ژن فیتاز خارج سلولی باکتری باسیلوس سابتیلیس phyc با استفاده از آغازگرهای اختصاصی و لینکردار حاوی سایت های برشی bamhi و hindiii جداسازی شد. به منظور انجام توالی یابی و بررسی خصوصیات، ژن تکثیر شده phyc به ناقل ptz57r/t انتقال داده شد. حضور ژن هدف در ناقل کلونینگ ptz57r/t با استفاده از روش کلونی pcr و هضم آنزیمی تایید شد. ساختارهای نوکلیوتیدی و پیش بینی ساختار پروتیینی آنزیم فیتاز با استفاده از آنالیز توالی یابی مشخص گردید. وزن مولکولی آنزیم فیتاز 42 کیلو دالتون تخمین زده شد. نتایج این مطالعه نشان داد که به خوبی می توان نسبت به کلونینگ ژن فیتاز در وکتور کلونینگ اقدام کرد. از طرف دیگر پیش بینی مجازی آنزیم فیتاز با استفاده توالی نوکلیوتیدی و اسید آمینه، پتانسیل تولید آنزیم مقاوم به حرارت را نشان داد.