شناسایی و کلون‌سازی خانواده ژنی چالکون سنتاز گیاه خار مریم (Silybum marianum L.)

سیلی مارین یک ترکیب فلاونوییدی است که از دانه‌‌های گیاه خارمریم به دست می آید و دارای خواص دارویی متعددی می‌باشد. چالکون سنتاز نقش کلیدی در مسیر بیوسنتزی فلاونوییدها دارد بنابراین شناسایی ژن رمزده آن گامی مهم در مهندسی متابولوم گیاه خارمریم می‌‌باشد. بدین منظور پس از جمع‌آوری داده‌های توالی موجود در مورد خانواده ژنی چالکون سنتاز در سایر گیاهان، همردیفی آن ها و تعیین نواحی حفظ شده، چهار آغازگر دژنره بر اساس این نواحی طراحی شد. قطعات ژنی تکثیر شده در pcr با استفاده از این جفت آغازگر از ژنوتیپ بومی منطقه برازجان و رقم اصلاح شده مجار در ناقل مناسب همسانه‌سازی و سپس تعیین توالی شدند. مطالعه توالی نوکلیوتیدی حاصل و توالی اسیدآمینه‌ای آن ها، منجر به شناسایی دو عضو از خانواده ژنی چالکون سنتاز در این گیاه گردید. بر اساس نقاط متنوع، شش آغازگر اختصاصی برای هریک از اعضا جهت تکثیر cdna از روی rnaی کل رقم مجار درسیستمrace طراحی شد. قطعات cdnaی تکثیر شده در3'race و5'race در ناقل مناسب همسانه سازی و سپس تعیین توالی شدند. توالی کامل cdnaی ژن چالکون سنتاز از همپوشانی توالی های5'race و 3'race عضو یک شناسایی گردید که قالب باز خواندنی آن دارای 1239 باز بوده و شامل اگزون یک (190 باز) و اگزون دو (1049 باز) می‌باشد که به ترتیب 63 و 349 اسیدآمینه را رمز می کنند. مطالعه کل توالی‌های نوکلیوتیدی و اسیدآمینه‌ای به دست آمده، منجر به شناسایی سه عضو از خانواده ژنی چالکون سنتاز در این گیاه برای اولین بار شد که دارای دومین های حفظ شده انتهای آمین و کربوکسیل چالکون سنتاز می‌باشند.