القای پاسخ‏های ایمنی اختصاصی در موش‏های تلقیح شده با پلاسمید یوکاریوتی بیان کننده اپیتوپ g1 از ویروس تب بی دوام گاوی

هدف: تب بی دوام گاوی (bef) یک بیماری ویروسی قابل انتقال توسط بندپایان در گاو و گاومیش آبی است که موجب بروز خسارات اقتصادی و تجاری قابل توجهی بر صنعت دامپروری می‏گردد. گلیکوپروتئین g از ویروس تب‏ بی‏دوام گاوی (befv) به عنوان یک کاندیدای احتمالی جهت تولید واکسن‏های نوترکیب در برابر این بیماری شناخته شده است. هدف از این مطالعه، بررسی ایمنی‏زایی یک پلاسمید یوکاریوتی بیان کننده اپیتوپ g1 از ژن گلیکوپروتئین g ویروس تب بی‏دوام گاوی به عنوان یک واکسن dna احتمالی در موش بود.مواد و روش‌ها: ابتدا پلاسمید یوکاریوتی بیان کننده اپیتوپ g1 تحت عنوان pegfpn1-g1 ساخته شد. پس از انتقال سازه نوترکیب pegfpn1-g1 به سلول‏های جنینی کلیه انسان (hek 293)، بیان پروتئین g1 با استفاده از روش‏ ایمونوفلورسنس غیر مستقیم (ifa) تایید شد. سپس به منظور انجام آزمایش‏های ایمنی‏زایی، موش‏های ماده با سن شش تا هشت هفته در چهار گروه پنج تایی، سه مرتبه و به صورت داخل عضلانی با سازه نوترکیب pegfpn1-g1، واکسن تجاری تب بی دوام گاوی، پلاسمید pegfp-n1 و بافر pbs 1x با فواصل زمانی دو هفته‏ای مورد تلقیح قرار گرفتند. 14 روز‏ پس از آخرین تزریق، حیوانات خونگیری شدند و سرم آن‏ها به منظور بررسی تولید آنتی‏بادی‏های اختصاصی علیه پروتئین g1 در آزمایش‏های ایمونوبلات، الایزا (elisa) و خنثی سازی ویروس (vn) مورد استفاده قرار گرفت. مقادیر چگالی نوری تمامی نمونه‎های سرمی بدست آمده از آزمایش الایزا در قالب یک طرح کاملاً تصادفی با چهار تیمار و پنج تکرار با استفاده از نرم افزار sas مورد آنالیز آماری قرار گرفت.نتایج: نتایج آزمایش‏های ایمونوبلات و آنالیز آماری نمونه‎های سرمی بدست آمده از آزمایش الایزا نشان دادند که سازه‏ نوترکیب pegfpn1-g1 توانست موجب القای ایمنی و تولید آنتی‏بادی اختصاصی علیه آنتی‏ژن g1 در موش‏ها شود. با این حال، سرم‏ موش‏های تلقیح شده با این پلاسمید نتوانست ویروس تب بی دوام گاوی در حال تکثیر را خنثی کند.نتیجه‌گیری: از آنجایی که سازه‏ نوترکیب pegfpn1-g1 توانایی تولید آنتی‏بادی‏های اختصاصی علیه آنتی ‏ژن g1 از ویروس تب بی دوام گاوی را در مدل حیوانی داشت، نتایج این مطالعه می‏تواند گامی در جهت توسعه واکسن‏های نوین برای بیماری تب بی دوام گاوی در آینده باشد.

induction of specific immune responses in inoculated mice by a eukaryotic plasmid expressing the g1 epitope of bovine ephemeral fever virus

objective bovine ephemeral fever (bef) is an arthropod-borne viral disease of cattle and water buffalos which causes considerable economic and commercial losses in the cattle industry. the g glycoprotein of bovine ephemeral fever virus (befv) has been identified as a plausible candidate to product recombinant vaccines against this disease. the aim of this study was to investigate the immunogenicity of a eukaryotic plasmid expressing the g1 epitope of bovine ephemeral fever virus g glycoprotein as a possible dna vaccine in mice.materials and methodsat first, a eukaryotic plasmid expressing the g1 epitope of bovine ephemeral fever virus g glycoprotein was constructed and designated as pegfpn1-g1. after transfection of the pegfpn1-g1 recombinant construct to human embryonic kidney 293 (hek 293) cells, the expression of g1 protein was confirmed by indirect immunofluorescent staining (ifa). immunization experiments were intramuscularly carried out by inoculating 6-8-week-old female mice in four groups with five repeats, including the pegfpn1-g1 recombinant construct, bovine ephemeral fever-inactivated vaccine, pegfp-n1 plasmid alone, and phosphate-buffered saline (pbs) (1x) three times with 2-week intervals. fourteen days after the last immunization, the animals were bled and the resulting sera were tested for anti-g1-specific antibodies by immunoblotting analysis, indirect enzyme-linked immunosorbent assay (elisa) and virus neutralisation (vn) test. the optical density values of all the serum samples obtained from the elisa assay were statistically analyzed in the form of a completely randomized design with four treatments and five replications using sas software.results immunoblotting analysis and statistical analysis of serum samples obtained from the elisa assay showed that the pegfpn1-g1 recombinant construct was able to elicit specific antibodies against g1 antigen of bovine ephemeral fever virus in mice. however, the serum of mice inoculated with this plasmid could not neutralize the replicating bovine ephemeral fever virus in virus neutralization assay.conclusionssince the pegfpn1-g1 recombinant construct had the ability to produce specific antibodies against the g1 antigen of bovine ephemeral fever virus, the results of this study can be a step towards the development of new vaccines for bovine ephemeral fever in the future.