بررسی اثرات چندشکلی‌های ژن‌های atpase6 و atpase8 بر بلوغ برون‌تنی تخمک‌ و کشت برون‌تنی جنین‌ در گوسفند سنجابی

هدف: میتوکندری به دلیل نقش های مهمی که در متابولیسم سلول دارد و به دلیل اینکه عمدتا از طریق مادر در حیوانات به ارث می رسد، یک منبع عالی برای توضیح وراثت سیتوپلاسمی است. در حیوانات اهلی مطالعات مختلفی ارتباط بین چندشکلی‌های dna میتوکندری و صفات تولیدی و تولید مثلی را گزارش کرده اند. هدف از این مطالعه بررسی چندشکلی ژن‌های atpase6 و atpase8 و اثر آنها بر میزان موفقیت بلوغ برون‌تنی تخمک‌ها (ivm) و کشت برون‌تنی جنین‌ها (ivc) در گوسفندان سنجابی بود. مواد و روش‌ها: نمونه‌های خون و تخمدان میش‌های بالغ از کشتارگاه بیستون واقع در کرمانشاه جمع آوری شد. در آزمایشگاه پس از جداسازی بافت اضافی پیرامون تخمدان‌ها و شستشوی آنها، مجموعه کومولوس تخمک‌های با قطر بیشتر از 3 میلی متر از فولیکول‌ها آسپیراسیون شد. تعداد 100 نمونه که تعداد بیش از دو تخمک داشتند، به دیش‌های حاوی محیط بلوغ انتقال داده شدند. بعد از بلوغ تخمک‌ها، برای لقاح برون تنی هر نمونه، از اسپرم تازه قوچ سنجابی استفاده شد. برای کشت برون تنی، زیگوت‌های تشکیل شده در مرحله قبلی در محیط مایع تخمدانی سنتز شده به مدت 48 ساعت کشت داده شدند. استخراج dna با استفاده از روش نمکی انجام شد. قطعه 895 جفت بازی از dna میتوکندری که شامل ژن‌های atpase6 و atpase8 بود با استفاده از pcr تکثیر شدند و نمونه‌ها با استفاده از یک روش تغییر یافته sscp ژنوتیپ شدند. برای بررسی ارتباط الگوهای مشاهده شده با نرخ بلوغ و کشت رویان از آزمون ناپارامتری کروسکالوالیس استفاده شد. نتایج: نتایج این مطالعه وجود چند شکلی‌ها در نواحی ژنی مورد مطالعه را نشان داد و پنج الگوی مختلف باندی a (50 درصد) ، b (12 درصد) ، c (9)، d (21) و e (8 درصد) برای ژنها مشاهده شد. تجزیه و تحلیل ارتباط این الگوها با نرخ بلوغ و کشت رویان حاکی از نبود ارتباط معنی دار بین آنها بود (p>0.05). نتیجه‌گیری: با وجود مشاهده چندشکلی در ژن‌های atpase6 و atpase8 با استفاده از روش تغییر یافته sscp، این چندشکلی های تاثیری بر نرخ بلوغ و کشت رویان نداشتند.

Effects of polymorphism of ATPase6 and ATPase8 genes on in vitro oocyte maturation and embryo culture of Sanjabi sheep

Objective Mitochondria are an excellent source for explaining cytoplasmic inheritance because of their important roles in cell metabolism and because they are primarily inherited maternaly in animals. In domestic animals, various studies have reported an association between mitochondrial DNA polymorphism and production and reproduction traits. The aim of this study was to investigate the polymorphism of ATPase6 and ATPase8 genes and their effects on the rates of in vitro maturation of oocytes (IVM) and in vitro culture of embryos (IVC) in Sanjabi sheep. Materials and methods Blood and ovary samples of adult Sanjabi ewes were collected from Bistoon slaughterhouse located in Kermanshah. In the laboratory, after separating the excess tissue around the ovaries and washing them, a cumulusoocyte complex with a diameter of more than 3 mm from the follicles was aspirated. 100 samples containing more than two oocytes were transferred to dishes containing in vitro maturation (IVM) medium. After the oocytes matured, fresh Sanjabi ram sperm were used for in vitro fertilization of each sample. For in vitro culture, putative zygotes formed in the previous stage were cultured in synthesized ovarian fluid medium for 48 hours. DNA extraction was performed using the salting out method. A 895 bp fragments of DNA containing ATPase6 and ATPase8 genes were amplified by PCR and the samples were genotyped using a modified SSCP method. The KruskalWallis nonparametric test was used to investigate the relationship between the observed genotype patterns and IVM and IVC rates. Results The results of this study showed the existence of polymorphisms in the studied gene regions and five different band patterns A (50%), B (12%), C (9), D (21) and E (8%) were observed. Analysis of the relationship between these patterns and IVM and IVC showed no significant relationship between them (p>0.05). Conclusions Despite the observation of polymorphisms in ATPase6 and ATPase8 genes using the modified SSCP method, these polymorphisms had no effect on the rate of IVM and IVC.