جداسازی ملکولی cdna کدکننده n-methylstylopine hydroxylase از مامیران کبیر (chelidonium majus l.) و افزایش بیان آن در پاسخ به محرک غیرزیستی شوری

مامیران کبیر (chelidonium majus l.) حاوی ترکیبات آلکالوئیدی مهم از جمله سنگوئینارین است. سنگوئینارین یک آلکالوئید فعال دارای خواص دارویی بالقوه ضدمیکروبی، ضدالتهابی و ضدتوموری می باشد که به‌طور گسترده در گیاهان خانواده خشخاش وجود دارد. در این تحقیق جداسازی و تعیین توالی cdna کد کننده آنزیم (s)-cis-n-methylstylopine 14-hydroxylas (msh) در مامیران-کبیر به‌عنوان یکی از آنزیم‌های کلیدی مسیر تولید سنگوئینارین انجام شد. سپس تغییرات بیان ژن cmmsh در سه اندام‏ ریشه، برگ و ساقه در چهار سطح شوری (صفر، 25، 50 و100 میلی مولار) به-صورت فاکتوریل در قالب طرح پایه کاملاً تصادفی بررسی شد. در پژوهش حاضر cdna کد کننده آنزیم cmmsh از بافت ریشه جداسازی، با موفقیت در ناقل پلاسمیدیptg19-t درج و سپس در باکتری e .coli همسانه‌سازی شد. پس از تایید همسانه‌های نوترکیب با روش pcr، پلاسمید باکتری‌های نوترکیب استخراج و قطعه ژنی توالی‌یابی شد. قطعه توالی‌یابی شده دارای 784 نوکلئوتید با یک چارچوب قرائت باز 261 اسیدآمینه‌ای بود و مشخص گردید پروتئین حاصل با داشتن دامین‌های کارکردی helix k region، heme-binding region و aromatic region متعلق به خانواده پروتئینی cytochrome-p450 می‌باشد. در درخت فیلوژنی، توالی پروتئینی ژن cmmsh جداسازی شده بیشترین شباهت را با آنزیم methylstylopine 14-hydroxylase گیاه خشخاش داشته است. مقایسه میانگین بیان نسبی ژن نشان داد که شوری50 میلی مولار بیشترین تاثیر را بر افزایش بیان ژن cmmsh در بافت ریشه دارد. همچنین بررسی الگوی تغییرات بیان ژن نشان داد که با افزایش سطح شوری تا 50 میلی مولار، بیان ژن cmmsh در دو اندام برگ و ریشه زیاد شده و با افزایش شدت شوری به 100 میلی مولار میزان بیان ژن به مقدار 35 درصد در هر دو اندام کاهش یافت.