بهینه سازی توالی کدکننده فاکتور رشد فیبروبلاستی بازی انسانی بمنظور بیان در گیاه برنج و همسانه سازی آن تحت کنترل توالی های تنظیم کننده ژن ramy3d در ناقل دوتایی pcambia1304

فاکتور رشد فیبروبلاستی بازی انسانی (bfgf) یک پروتئین بسیار با ارزش با کاربردهای گسترده درمانی و تحقیقاتی است. در حال حاضر تولید این فاکتور رشد بشکل نوترکیب در بسترهای مرسوم میکروبی و سلول های حشرات با مشکلاتی همراه است که منجر به هزینه تولید بالا و در نتیجه محدود ساختن کاربرد آن شده است. کشت سلولی گیاه برنج بستری کارامد، ایمن و کم هزینه برای تولید پروتئین نوترکیب است. هدف از این تحقیق تهیه یک سازه بیانی مناسب برای بیان بالای نسخه بهینه سازی شده ای از فاکتور رشد انسانی bfgf در کشت سلولی گیاه برنج تحت کنترل عوامل تنظیمی ژن ramy3d بوده است. برای این منظور ابتدا توالی کدکننده فاکتور bfgf بر اساس شاخص های کاربرد کدونی و محتوای gc برای بیان در گیاه برنج بهینه سازی و در ادامه سنتز شد. بدنبال فرایند بهینه سازی، شاخص سازگاری کدونی از 0/76 به 0/82 و محتوای gc از 52/65 درصد به 55/45 درصد ارتقا یافت. توالی های تنظیم کننده ژن ramy3d برنج در قالب دو قطعه مجزا از روی dna ژنومی تکثیر و همسانه سازی شدند. در ادامه اقدام به سرهم سازی توالی های تنظیم کننده ژن ramy3d در ناقل دوتایی گیاهی pcambia1304 و سپس درج توالی کدکننده بهینه سازی شده ی bfgf در حدفاصل توالی پپتید راهنما و 3′utr شد. از جمله مزیت های سیستم بیانی ramy3d می توان به میزان بیان بالای ژن انتقالی، القاپذیر بودن و همچنین سهولت تخلیص پروتئین بواسطه ترشح به محیط اشاره کرد.