بررسی تاثیر سلولهای بنیادی مزانشیمی مغز استخوان و فاکتورهای رشد بر روی تکثیر سلولهای بنیادی خونساز بندناف در محیط آزمایشگاه

مقدمه: خون بندناف یکی از مهمترین منابع سلولهای بنیادی خونساز(hscs) است، اما متآسفانه تعداد محدود آنها در واحدهای خون بندناف استفاده از این منبع را در پیوند سلولهای بنیادی برای بزرگسالان محدود نموده است. یکی از روشهای بکار گرفته شده برای غلبه بر این مشکل ، تکثیر سلولهای بنیادی خونساز در محیط کشت است که میتوان علاوه بر فاکتورهای رشد افزودنی از عواملی مانند سلولهایی بنیادی مزانشیمی (mscs) به عنوان لایه feeder برای تکثیر ex vivo سلولهای بنیادی خونساز استفاده نمود.روش کار: سلولهای cd34+ در دو شرایط مختلف کشت داده شدند شامل : 1) کشت سلولهای cd34+ در محیط فاقد سرم (stemspan ) و در حضور فاکتورهای رشد 2) کشت سلولهای cd34+ بر روی لایه فیدر سلولهای مزانشیمی در محیط حاوی فاکتورهای رشد. محیط های کشت پس از 8 روز از لحاظ مارکر سطحی cd34، تعداد کل سلولهای هسته دار (tncs) و آزمون کلونی زایی مورد ارزیابی قرار گرفتند.یافته ها: میانگین تعداد سلولهای cd34⁺ و tncs در محیط اول به ترتیب 1.9 ±10.8 ، 3 ±32.2 برابر و در محیط دوم به ترتیب7.3 ±40.9 ، 8.1 ±63.5 برابر بود. اختلاف تعداد سلولها در دو محیط در روز پایانی کشت نسبت به تعداد سلولها در روز صفر (قبل از تکثیر) معنی دار بود (0.05>p).نتیجه گیری: بکار گیری فاکتورهای رشد و و سلول های بنیادی مزانشیمی بصورت همزمان در محیط های کشت میتواند به ازدیاد hscs در محیط آزمایشگاه کمک شایانی نماید.

Effect of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells and Growth Factors on Umbilical Cord Blood Hematopoietic Stem Cells Proliferation in ex vivo

Introduction: Umbilical cord blood (UCB) is one of the most important sources of hematopoietic stem cells (HSCs). However, the limited amount of HSCs in UCB has been an obstacle for transplantation of adult hematopoietic stem cell. One of the applied methods to overcome this problem is the proliferation of HSCs in culture medium, so beside the additive growth factors, some other factors such as Mesenchymal stem cells (MSCs) as feeder layer can be used for the proliferation of Hematopoietic stem cells in ex vivo.Methods: CD34+ cells were cultured in two different media including; 1) culturing CD34+ cells in serum free medium (Stemspan) and in the presence of growth factors, 2) culturing CD34+ cells on feeder layer of Mesenchymal stem cells (MSCs) in media including the growth factors. These culture media were evaluated in terms of the number of total nucleated cells (TNCs), CD34 surface marker and CFU assay eight days after the culture.Results: The mean of CD34+ cells and TNCs in the first medium was 10.8 ±1.9 and 32.2 ±3.0 and in the second medium was 40.9 ±7.3 and 63.5 ±8.1, respectively. The difference between the number of cells in two culture media in the last day of culture and before the proliferation (0 day) was statistically significant (P<0.05).Conclusions: The simultaneous application of growth factors and MSCs in culture media could largely contribute to the proliferation of HSCs in ex vivo.