|
|
|
|
بیان فاکتور رونویسی دوپامینرژیکی nurr1 در سلولهای انسانی بهوسیله لنتی ویروسهای نوترکیب
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
گردانه موسی ,رحیمی شم آبادی عباس ,اسماعیل زاده عمران
|
|
منبع
|
سلول و بافت - 1395 - دوره : 7 - شماره : 1 - صفحه:1 -7
|
|
چکیده
|
هدف: هدف این تحقیق تولید لنتی ویروسهای حامل ژن nurr1 و بیان در سلولهای انسانی میباشد. مواد و روشها: قطعه ژنی iresegfp با آنزیمهای bgl ll/not1 از ناقل pires2egfp جدا و با klenow کور (blunt) گردید. ناقل لنتی ویروسی pnlegfp/cmv/wpredu3 با آنزیمهای nhe1/ xho1 برش و دو سر آن کور شد. قطعه ژنی ایزوله شده به این ناقل منتقل شد تا سازه لنتی ویروسی (i) بهوجود آید. سپس ژن nurr1 با آنزیمهای xho1 و bamh1 از ناقل pcmxnot بریده و درون پلاسمید (i) خطی شده باsal1 و bamh1 منتقل شد تا سازه نهایی لنتی ویروسی (ii) تولید گردد. برای تولید لنتی ویروسهای نوترکیب، رده سلول انسانی hek293t را با این پلاسمید نهایی، بههمراه پلاسمیدهای غشایی و بسته بندی لنتی ویروس ترانسفکت شد. محیط این سلولها که مملو از ذرات ویروسی شده بود جمع آوری و از ستون آمیکون عبور داده شد تا ذخیره غلیظ ویروس بهدست آید. این ذخیره برای آلوده سازی سلولهای هدف استفاده شد. بیان egfp در زیر میکروسکوپ به اثبات رسید و بیان ژن nurr1 با rtpcr سنجیده شد. نتایج: درستی مراحل کلونینگ با آنزیمهای مربوطه اثبات شد. با میکروسکوپ فلورسنس بیان enhanced green fluorescent protein (egfp) در هر دو مرحله ترانسفکشن و ترانسدوکشن ثابت گردید. تکنیک rtpcr بیان nurr1 را در هردو مرحله به اثبات رسانید. نتیجه گیری: لنتی ویروسهای ناقل ژن انسانی nurr1 تولید شده و بهدنبال آلوده سازی سلولهای انسانی hek293t با ویروسهای مزبور، سلولهای فوق ژن nurr1 را بهطور موفقیت آمیز بیان کردند.
|
|
کلیدواژه
|
فاکتور رونویسی دوپامینرژیکی، لنتی ویروس، سلول hek293t
|
|
آدرس
|
دانشگاه آزاد اسلامی واحد آیت الله آملی, گروه زیست شناسی, ایران, پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری, ایران, پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری, ایران
|
|
پست الکترونیکی
|
emran.esmaeilzade@gmail.com
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Expression of Dopaminergic Transcription Factor Nurr1 in Human Cells Via Recombinant Lentiviruses
|
|
|
|
|
Authors
|
G M ,R A ,E E
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|