بیان فاکتور رونویسی دوپامینرژیکی Nurr1 در سلول‏های انسانی به‏وسیله لنتی ویروس‏های نوترکیب

هدف: هدف این تحقیق تولید  لنتی ویروس‏های حامل ژن nurr1 و بیان در سلول‏های انسانی می‏باشد. مواد و روش‏ها: قطعه ژنی iresegfp با آنزیم‏های bgl ll/not1 از ناقل pires2egfp جدا و با klenow کور (blunt) گردید. ناقل لنتی ویروسی  pnlegfp/cmv/wpredu3 با آنزیم‏های nhe1/ xho1 برش و دو سر آن  کور شد.  قطعه ژنی ایزوله شده به این ناقل منتقل شد تا سازه لنتی ویروسی (i) به‏وجود آید. سپس ژن nurr1  با آنزیم‏های xho1 و bamh1 از ناقل pcmxnot بریده و درون پلاسمید (i) خطی شده باsal1 و bamh1 منتقل شد تا سازه نهایی لنتی ویروسی (ii) تولید گردد. برای تولید لنتی ویروس‏های نوترکیب، رده سلول انسانی hek293t  را با این پلاسمید نهایی، به‏همراه پلاسمیدهای غشایی و بسته بندی لنتی ویروس ترانسفکت شد. محیط این سلول‏ها که مملو از ذرات ویروسی شده بود جمع آوری و از ستون آمیکون عبور داده شد تا ذخیره غلیظ ویروس به‏دست آید. این ذخیره برای آلوده سازی سلول‏های هدف استفاده شد. بیان egfp در زیر میکروسکوپ به اثبات رسید و بیان ژن nurr1 با rtpcr سنجیده شد. نتایج: درستی مراحل کلونینگ با آنزیم‏های مربوطه اثبات شد. با میکروسکوپ فلورسنس بیان enhanced green fluorescent protein (egfp) در هر دو مرحله ترانسفکشن و ترانسدوکشن ثابت گردید. تکنیک rtpcr بیان nurr1 را در هردو مرحله به اثبات رسانید. نتیجه گیری: لنتی ویروس‏های ناقل ژن انسانی nurr1 تولید شده و به‏دنبال آلوده سازی سلول‏های انسانی hek293t با ویروس‏های مزبور، سلولهای فوق ژن nurr1 را به‏طور موفقیت آمیز بیان کردند.