القای التهاب عصبی با فعال ‏سازی سلول‏های میکروگلیا و تاثیر آن بر بقای نورون ‌های دوپامین ‌ساز

هدف: هدف از این مطالعه جداسازی سلول‏های میکروگلیا از مغز نوزاد موش صحرائی، فعال کردن آن ها با  لیپوپلی ساکارید (lps) و بررسی اثر فاکتورهای التهابی تولیدی توسط سلول‏های مزبور، روی سلول‏های نورونی دوپامین ساز می باشد.مواد و روش ها: سلول‏های مخلوط گلیال از مغز نوزادان موش صحرایی 1 تا 3 روزه، تهیه و سپس سلول‏های میکروگلیا از آن‏ها جدا شدند. پس از تیمار میکروگلیا با lps محیط مشروط آن‏ها جمع آوری شد. سلول‏های نورونی دوپامین ساز رده  shsy5yدر پلیت های 96 خانه ای کشت داده شدند تا با محیط مشروط مزبور تیمار گردند. میزان بقا و مرگ نورون‏ها با تست های ­mtt  و آپوپتوزیس ارزیابی شد  و داده‏ها آنالیز آماری شدند.نتایج: سلول‏های مخلوط گلیال پس از گذشت 10 الی 13 روز شامل مخلوطی از سه نوع سلول آستروگلیا، الیگودندروسیت و میکروگلیا بودند. میکروگلیاها به‏صورت شناور و نیمه چسبیده در سطح قرار داشتند. این سلول‏ها 24 ساعت پس از جداسازی و انتقال به ظرف جدید، فرمی دوکی و منشعب به خود گرفتند. در این زمان سلول‏های مزبور با lps تیمار شدند تا فعال شوند. فعال سازی آن ها با این ماده، از طریق تغییر مورفولوژیک سلول‏ها از فرم دوکی به آمیبی، مشاهده افزایش تولید no با کمک تست گریس و القای بیان ژن های التهابی (tnfα , inos) به اثبات رسید. همچنین تیمار سلول‏های نورونی دوپامین ساز  shsy5yبا محیط مشروط میکروگلیای فعال شده، منجر به آپوپتوزیس و نکروزیس شد.نتیجه گیری: فعال‏سازی میکروگلیا با  lps منجر به بیان و ترشح فاکتورهای التهابی می شود. میزان زیاد فاکتورهای مزبور با ایجاد التهاب عصبی، منجر به مرگ آپوپتوتیک و نکروتیک سلول‏های دوپامین ساز می شود.

Induction of neuro-inflammation by activating microglial cells and its impact on survival of dopaminergic neurons

Aim: The aim of the current study was to isolate microglial cells from neonatal rat brain, activate the cells using lipopolysaccharide (LPS) and examine the effect of the inflammatory factors that they express on dopaminergic (DAergic) neurons.Materials and Methods: mixed glial cells were isolated from 13 day rat neonatal brains and then microglial cells were extracted from them. Upon treatment of the cells with LPS, their conditioned media (CM) were collected. DAergic SHSY5Y cell line was seeded in 96well plates and fed with the collected CM. The rate of viability and apoptosis of the neuronal cells was examined using MTT and apoptosis tests and the data were analyzed statistically.Results: Ten to thirteen days after isolation, mixed glial cells were composed of three types: astroglia, oligodendrocytes and microglia. Microglia were floating while semiattached to the surface. Twenty four hours postisolation, these cells were transferred to and cultured in separate dishes where they formed spindled and ramified phenotypes. At this stage, the cells were treated with LPS to be activated. This activation was demonstrated by morphological changes from spindlelike form to amoeboid form, detection of increase in NO expression using Griess test and induction of inflammatory iNOS and TNFα gene expression. Also teatment of SHSY5Y cell line with conditioned medium of activated microglia led to both apoptotic and necrotic cell death.Conclusion: LPSmediated activation of microglia results in overexpression of neuroinflammatory markers. The overproduction of these markers results in both apoptotic and necrotic cell death amongst DAergic neurons via neuroinflammation.