بیان القایی ژن گزارشگرgfp در رده سلولی lmh با استفاده از ناقلین لنتی ویروسی القا پذیر

هدف: با تلفیق سیستم االقایی تتراسیکلین (tetinducible system) و ناقلین لنتی ویروسی، القا بیان ژن گزارشگر enhanced green fluorescent protein (egfp) در سلول‏های پرندگان مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش‏ها: ژن egfp تحت کنترل سیستم‏ teton قرار گرفت و بیان آن در سلول های کبدی جوجه رده lmh بررسی شد. ابتدا باکتری‏های مستعد با ناقل لنتی ویروسی القایی حامل egfp به‏همراه یک ناقل دوم که فعال کننده tet (tettransactivator) به‏نام rttam2 را حمل می‏کرد ترانسفورم شده و ذخیره ماکسی پرپ خالصی از هریک از این‏دو dna پلاسمیدی فراهم شدند. سپس با روش رسوب dnaفسفات کلسیم سلول‏های lmh با ذخیره هردو پلاسمید ترانسفکت شد. در مرحله بعد، غلظت‏های سریالی از آنالوگ tet یعنی داکسی سیکلین را به محیط کشت سلول اضافه نمودیم به‏‏طوری‏که با افزایش غلظت dox، بیان egfp بیشتر القا گردید. نتایج: افزایش غلظت داکسی سایکلین افزایش بیان را به دنبال داشت. در 24 ساعت اول بعد از ترانسفکشن بیان به‏ترتیب برای غلظت‏های 0 ، 0/01 ، 0/1 و 1 میکروگرم بر میلی‏لیتر داکسی سایکلین 0/4، 6/2 ، 10/3 و 16 درصد و در 24 ساعت دوم به‏ترتیب 6/4 ، 26 ، 3/28 و29/2 بود.با این .جود، افزایش بیش از حد غلظت داکسی سایکلین باعث مرگ سلول­ها گردید. نتیجه گیری:  تلفیق سیستم‏های القایی tet با منشا باکتریایی و لنتی ویروس‏های نوترکیب مرتبط با انتقال ژن به سلول‏های انسانی می‏تواند باعث القا ژن در سلول‏های پرندگان شود. غلظت القا کننده بر میزان القا بیان ترانسژن تاثیر مستقیم می‏گذارد.

Inducible Gene Expression of GFP Reporter Gene in LMH Cell Line Using Inducible Lentivirus Vectors

Aim: By combining Tetinducible system and lentivirus vectors, we investigated the induction of Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) reporter gene in poultry cells. Material and Methods: the EGFP gene was placed under TetON system and its induction was studied in liver cell line LMH. First, we transformed competent bacteria separately with an inducible lentivirus vector carrying EGFP and a second vector carrying Tet transactivator rtTAM2 and prepared a purified maxiprep stock of either plasmid DNA. Then, we used DNAcalcium phosphate coprecipitation method to cotransfect LMH cells with both plasmid stocks. In the next step, we added different concentrations of Tet analog doxycycline (DOX) to cell growth medium. Results: Increase of DOX concentration caused elevation of gene expression Within the first  24  hours after posttransfection, the expression of EGFP for 0, 0.01, 0.1 and 1 µg/ml of DOX was 0.4, 6.2, 10.3 and 16% respectively, and in the next 24 hours the expression changed to 6.4, 26, 28.3 and 29.7% respectively. However, treatment with the overdose of DOX caused the cell death. Conclusions: Combination of Tetinducible system originating from bacteria and recombinant lentivirus vectors designed for gene transfer to human cells can jointly promote transgene expression in poultry cells. The concentration of the inducer can directly influence the level of transgene induction.