تاثیر هم‏زمان -Azacytidin5 و DMSO در القای تمایز کاردیومیوسیت‏ها از سلول‏های کارسینومای جنینی P19 در شرایط آزمایشگاهی

هدف: در مطالعه حاضر توانایی تمایز سلول‏های کارسینومای جنینی p19در حضور هم‏زمان -azacytidin5 و dmso به کاردیومیوسیت‏ها مورد ارزیابی قرار گرفت.مواد و روش‏ها: جهت تمایز سلول‏های p19، اجسام شبه جنینی (embryoid bodies,ebs) به‏روش قطرات آویزان طی 2 روز تشکیل شدند. سپسebs به‏مدت 10 روز تحت القای 2 میکرومولار (5-aza group) 5-azacytidin، (dmso group) dmso، 5/0 درصد و ترکیب dmso و 5-azacytidin (aza+dm group) قرار گرفتند. طی تمایز تعداد ضربان در دقیقه هر دو روز یکبار در گروه‏های مختلف به‏وسیله میکروسکوپ معکوس شمارش شدند. بیان ژن‏های نظیر (?-myosin heavy chain, ?-mhc)، (myosin light chain, mlc) و (connexin-43) به‏وسیله rt-pcr در روز دهم پس از القا بررسی شدند. جهت بیان پروتیین f-actin از ایمونوسیتوشیمی استفاده شد. نتایج: تغییرات مورفولوژیکی زیادی در کاردیومیوسیت‏های مشتق شده از p19 به‏ویژه در گروه aza+dm group ایجاد شد به‏طوری‏که افزایش مشخصی در اندازه سیتوپلاسم و زواید سیتوپلاسمی آن‏ها دیده شد و به‏تدریج شاخه شاخه شدن زوایدشان افزایش یافت و با سلول‏های مجاور ارتباط برقرار کردند. نتایج شمارش روزانه تعداد ضربان در دقیقه در تمامی گروهها از روز 2+2 مشاهده شده و تا روز 8+2 بتدریج افزایش یافته است. در سلول‏های p19 که تحت القای هم‏زمان dmso و 5-aza بودند ژن‏های mlc و ?-mhc بیان شدند. کاردیومیوسیت‏های aza+dm group پروتیین f-actin را بیان کردند در حالی‏که این پروتیین در سایر گروه‏ها مشاهد نشد. نتیجه گیری: کاربرد هم‏زمان ترکیبات dmso و 5-azacytidin موجب بهینه سازی محیط کشت تمایزی کاردیومیوسیت‏ها از سلول‏های p19 می‏گردد.