همسانه‌سازی و مطالعه ویژگی های بیوانفورماتیکی ژن عامل آنزیم تروپینون ردوکتاز 2 (Tr Ii)از گیاه بنگدانه (Hyoscyamus Niger)

هدف: هدف از این پژوهش استخراج و همسانه سازی ژن تروپینون ردوکتاز 2 (tr-ii) در جهت آنتی سنس در ناقل دوتایی pbi121 جهت تهیه گیاهان تراریخت با توانایی کاهش آنزیم tr-ii و تولید بیشتر آلکالوییدهای هیوسیامین و اسکوپولامین در پروژه های آینده بود.مواد و روش ها: rna کل از ریشه‌های کشت شده گیاه بنگدانه بومی ایران استخراج و ژن هدف پس از ساخت cdna و همسانه-سازی در جهت آنتی سنس در ناقل دوتایی pbi121، به اگروباکتریوم تومیفسینس سویه gv3101 منتقل شد. درستی همسانه‌سازی به سه روش هضم آنزیمی، pcr و توالی‌یابی نوکلیوتیدی مطالعه گردید. سپس خصوصیات بیوانفورماتیکی ژن مورد بررسی قرار گرفت.نتایج: واکنش pcr، هضم آنزیمی و توالی یابی نوکلیوتیدی درستی همسانه سازی ژن هدف را با سودمندی بالا تایید کرد. توالی نوکلیوتیدی نشان داد که ژن هدف بطول bp 783 بوده و باستثنای یک نوکلیوتید، مشابه با نمونه ثبت شده در بانک جهانی nbci است و یک پروتیین با 260 اسیدآمینه را رمز می کند. وزن مولکولی و نقطه ایزوالکتریک پیش بینی شده پروتیین به ترتیب برابر 4/28437 دالتون و 46/5 بود. بررسی ساختارهای دو بعدی و سه بعدی نشان داد که پروتیین کاملا مشابه با آنچه که قبلا در پایگاه pdb ثبت شده بود، نبود. هم چنین، نتایج بررسی های فیلوژنتیکی نشان داد که این ژن به گروه i تروپینون ردوکتازها تعلق دارد.نتیجه گیری: با توجه به همسانه سازی موفقیت آمیز و مشابهت بالای توالی نوکلیوتیدی و پپتیدی ژن tr-ii با نمونه های ثبت شده جهانی، انتظار می‎رود مراحل بیان ژن در نیل به هدف اصلی نیز با موفقیت همراه باشد.