اثر پیش‌برنده آپوپتوزیس آگرین‫بی (augerin b) در رده سلولی سرطان کولورکتال ht29‬‬‬‬‬‬‬

هدف: در سال های اخیر فراورده های طبیعی اثرات ضد سرطان ارزشمندی ارائه کرده‫اند. جهت درک مکانیسم مولکولی اثر آگرین‫بی (aguerin b) در سرطان کولورکتال، هدف این پژوهش بررسی نوع مرگ سلولی القا شده توسط آگرین‫بی و بیان فاکتور سرکوب‫گر تومور p53  در سلول‫های سرطان کلورکتال ht29 است. مواد و روش‏ها: سلول‫های سرطان کلورکتال در محیط کشت dmem غنی شده با 10 درصد سرم جنین گاوی و 1 درصد آنتی بیوتیک پنی سیلین-استرپتومایسین درون پلیت 96 خانه کشت شد. پس از گذشت 24 ساعت، سلول‫ها توسط آگرین‫بی (غلظت‫های 1 تا 8 میکروگرم بر میلی‫لیتر) به‫مدت 24 و 48 ساعت تیمار شدند. آزمون mtt جهت ارزیابی بقای سلول‫ها، رنگ‫آمیزی اکریدین-اورنج-پروپودیوم-یداید، کیت کاسپاز 3، 9 و کیت dcf-da جهت تعیین نوع مرگ سلولی القا شده توسط آگرین‫بی و از qrt-pcr جهت ارزیابی بیان p53  در سطح رونویسی استفاده شد. نتایج: یافته ها نشان داد آگرین‫بی به‫صورت وابسته به دوز و زمان موجب القای اثرات سیتوتوکسیک در سلول‫های سرطان کولورکتال می‫شود. غلظت 6/4 میکروگرم بر میلی لیتر به‫عنوان غلظت میانه مهاری (ic50) مشخص شد. رنگ آمیزی اکریدین-اورنج-پروپودیوم-یداید نشان دهنده القای آپوپتوزیس تحت تیمار با غلظت میانه مهاری آگرین‫بی بود. افزایش فعالیت کاسپاز 3 و 9 و افزایش میزان ros، نشان‫دهنده القای آپوپتوزیس از طریق مسیر میتوکندری تحت تیمار با آگرین‫بی بود. به‫علاوه، افزایش بیان p53  نشان‫دهنده اثر سرکوب گر تومور تحت تیمار با آگرین‫بی بود. نتیجه‏گیری: با توجه به اعمال سمیت موثر و اثر القاکننده آپوپتوزیس، آگرین‫بی به‫عنوان یک ترکیب موثر در مهار سلول‫های سرطان کولورکتال انسانی ht29 در مطالعات پیش بالینی و بالینی پیشنهاد می شود.

apoptosis-promoting effect of augerin b in ht29 colorectal cancer cell line

introduction: colorectal cancer (crc) is the second most commonly diagnosed malignant tumor in the world, with about 1,926,425 new cases estimated for 2022. the most therapeutic approaches for crc include surgery, chemotherapy, targeted medicine, and radiation therapy. each of these treatments exerts side effects such as fatigue, constipation, loss of appetite, and low blood cell counts. natural products have provided valuable anticancer effects for years. an increasing number of studies have elucidated that plant-based natural compounds can act as an alternative chemotherapy option against crc. it has been demonstrated that herbal bioactive compounds such as flavonoids, alkaloids, peptides, terpenoids, and steroids have the potential to effectively treat crc. sesquiterpenoid lactones, a subclass of terpenoid compounds, have been shown to induce anti-tumor effects. aguerin b, a sesquiterpene lactone, exhibits cytotoxic effects against some types of tumors.aims: the current study aims to investigate the effect of aguerin b on ht29 colorectal cancer, and assess the molecular mechanism of aguerin b in colorectal cancer by evaluating the type of cell death it induces and its effect on the expression of the tumor suppressor gene p53 in ht29 colorectal cancer cells.materia and methods: colorectal cancer cells were purchased from the iranian biological resource center. ht29 cells were cultured in dmem medium enriched with 10% fetal bovine serum and 1% antibiotics in 96-well plates. after 24 hours, the cells were treated with aguerin b (variable concentrations from 1 to 8 μg/ml) for 24 and 48 hours. cell viability was assessed using the mtt assay. acridine orange-propidium iodide staining, caspase-3 and caspase-9 activity assays, using dcf-da kits, were used to determine the type of cell death induced by aguerin b. additionally, qrt-pcr was used to evaluate p53 expression at the transcriptional level.results: the findings demonstrated that aguerin b exerts cytotoxic effects on colorectal cancer cells in a dose- and time-dependent manner, with an ic50 (inhibitory concentration) value of 4.6 μg/ml. acridine orange-propidium iodide staining confirmed apoptosis induction at the ic50 concentration of aguerin b. the cultivated activity of caspase-3 and -9, along with elevated ros levels, indicated apoptosis induction via the mitochondrial pathway.