تاثیرعدم حضور هسته بر میزان آنزیم jnk از خانواده mapk گلبول‫های قرمز و مقایسه آن با گلبول‫های سفید‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬‬

هدف: آنزیم‫های  mapk، خانواده مهمی از پروتئین کینازها هستند که فسفوریلاسیون اسیدهای آمینه سرین، ترئونین و تیروزین را در آبشارهای کینازی اعضای خانواده و پروتئین‫های هدف در مسیرهای متابولیکی سلول‫ها را بر عهده داشته و در سلول‫های هسته‫دار از تک سلولی تا پرسلولی یافت می‫شوند. این آنزیم‫ها در تنظیم فرآیندهای مختلف سلول‫های یوکاریوت از جمله تکثیر سلولی، تمایز، بقا و آپوپتوزیس حضور داشته و در انواع مسیرهای پیام‫رسانی و بیان ژن هم نقش ایفا می‫کنند. در این تحقیق، میزان آنزیم jnk در سلول بدون هسته مانند گلبول‫های قرمز نسبت به میزان این آنزیم درگلبولهای سفید بررسی شد. مواد و روش ها:  گلبول‫های قرمز از خون تازه تهیه شد. و گلبول‫های سفید  از نوع تک هسته‫ای به‫کمک محلول جدا کننده فایکول  از خون جدا شده و  سوسپانسیون هر دو نوع سلول در محیط ایزوتونیک کلرور سدیم 9/0 درصد به‫طور مجزا فراهم  و بعد از شمارش تعداد آن‫ها توسط دستگاه سل کانتر به‫کمک امواج اولتراسوند لیز شدند و سپس میزان آنزیم jnk با استفاده از روش ایمونواسی elisa در نمونه‫های لیز شده اندازه گیری شد. نتایج: با توجه به این‫که  تعداد گلبول‫های قرمز در نمونه خون، در واحد حجم، نسیت به  تعداد گلبول‫های سفید، 1000 برابر بیشتر بود، میزان آنزیم jnk در  گلبول‫های سفید به‫ازای هر سلول   ng/ml  2- 10× 72/1 و  در گلبول‫های قرمز به‫ازای هر سلول  ng/ml     6- 10 x 2/6   بدست آمد. با مقایسه میزان این آنزیم در هر گلبول سفید و مقایسه آن در هر گلبول قرمز،  میزان  آنزیم  jnk  در گلبول‫های سفید درحدود2770بار بیشتر ازگلبول قرمز بود. نتیجه‫گیری: آنزیم‫های خانواده mapk در سلول‫های یوکاریوت از تک سلولی تا پرسلولی یافت می‫شوند گلبول‫های قرمز به‫دلیل از دست دادن هسته شان در مسیر رشد و تمایز خود از سلول‫های بنیادی مغز استخوان مسیرهایی مرتبط با آنزیم jnk را از دست داده‫اند در حالی‫که گلبول‫های سفید به‫دلیل حفظ هسته دارای میزان بالاتری از این آنزیم هستند. این یافته نشان دهنده نقش حضور هسته در پشتیبانی مسیر mapk می‫باشد.

the effect of the absence of nucleus on the amount of jnk enzyme from the mapk family of red blood cells and its comparison with white blood cells

aim: red blood cells and white blood cells are the main  cells of blood.these two types of cells have significant differences in number, nucleus, and other intracellular organelles such as mitochondria, ribosomes, and metabolic pathways. enzymes are important proteins found in these cells . mapkinase (mitogen activated protein kinase) superfamily are protein kinases playing key role in phosphorylation of threonine , thyrosine and serine in the enzymes of the family and target proteins during kinase cascades  in metabolic pathways  of cells. they are found in nucleated cells from unicellular to multicellular. these enzymes have important roles in regulating various processes of eukaryotic cells, including cell proliferation, differentiation, survival , apoptosis  and  in various signaling pathways and gene expression as well. these enzymes are ubiquitously expressed and evolutionarily conserved in eukaryotes. in mammalian cells, there are three well-known mapk   including  extracellular signal-regulated protein kinase (erk) 1/2 , c-jun n-terminal kinase 1, 2, 3 (jnk1/2/3) and p38 mapk α,β,δ,γerk, jnk and p38 isoforms are grouped according to their motif, structure and function.  erk 1/2 is related to  the response to growth factors, hormones and inflammatory stimuli, while jnk1/2/3 and p38 mapk α, β, δ, and γ are activated through environmental or cellular stress and inflammatory stimuli.jnk   enzyme is activated under stress. jnk pathway has role in apoptosis and cell survival. the presence of jnk is essential for stress-induced mitochondrial cytochrome c release. cytochrome c together with apaf activates the initiator caspase 9. if the defect in the release of cytochrome c from the mitochondrial membrane is likely to cause a defect in the release of pro-apoptotic molecules such smac/diablo, aif. the aim of the study is to investigate the jnk enzyme level in blood anucleated cell such as rbc compared to nucleated cell like wbc. materials and methods: rbcs were isolated from a fresh blood. wbcs (mononuclear) were separated from blood using ficoll solution.  their suspensions were prepared in isotonic condition using 0.9 % nacl. in next step, the number of cells counted by means of cell counter followed by lysis  rbcs by ultrasonic  homogenizer and  lysis of wbcs using  ultrasonic bath. considering that, the presence of hemoglobin following the lysis of rbcs affects the assay of jnk level by elisa immunoassay technique, hence 6 mm zinc sulfate used to remove the hemoglobin. two kinds of lysates were centrifuged to separate the  lysed cells membranes before assay the level of jnk.  then, the level of jnk in the rbc and wbc lysates were measured using elisa technique.results: regarding that the number of rbcs in sample was 1000 times more than wbcs one per sample volume, but the jnk enzyme level showing  1.72 x10 -2  ng/ml per cell and 6.2 x 10 -6  ng/ml per cell in wbcs and rbcs  respectively. as a result, jnk enzyme level in each wbc   is 2770 fold   more than each rbc.conclusion: in comparison with wbcs having nuclei and high level of   jnk enzyme,  rbcs due to losing their nuclei during differentiation from stem cells in bone marrow show low level of jnk enzyme denoting blocking of pathways related to mapk enzymes. this is an evidence that the absence of nucleus does not support of mapk family enzyme and related pathways.