بررسی پتانسیل القای آپوپتوزیس ترکیبات سنتزی مشتق از سورافنیب در سلول‌های سرطانی پستان

هدف: سرطان از جمله مهمترین بیماری های قرن حاضر است که افراد بسیاری در سراسر جهان به آن مبتلا می باشند و ضمن افزایش شیوع این بیماری، هنوز درمان مناسبی برای آن پیدا نشده است. در این بین سرطان پستان شایع ترین سرطان و همچنین علت اصلی مرگ و میر ناشی از سرطان در زنان در سراسر جهان است. محققان بدنبال یافتن راهکارهای درمانی سرطان، ترکیبات دارویی بسیاری را علیه سرطان های مختلف سنتز کرده و اثرات آ نها را مورد مطالعه قرار می دهند. سورافنیب یک مهار کننده ی اوره مولتی کیناز است که موجب القای آپوپتوزیس و مهار آنژیوژنز و تکثیر سلول های سرطانی می گردد. همچنین آزمایشاتی جهت بررسی عملکرد آن در درمان سایر سرطان ها نیز انجام شده است. مشتقاتی از سورافنیب نیز سنتز شده و مورد بررسی قرار گرفته اند. در تحقیق حاضر اثر ضد سرطانی یکی از مشتقات سورافنیب به نام (2e,2´e)-2,2´ - ( 1,4 فنیلن بیس (متانیلیدن)بیس(n- (4-کلرو-3-(تری فلوروم اتیل)فنیل)هیدرازین کربوکسامید) که به اختصار so-d-3 نامیده شد، علیه سه رده ی سلولی سرطان پستان مورد ارزیابی قرار گرفت. مواد و روش ها: سه رده ی سلولی سرطان پستان شامل mcf7، 4t1 و mda تهیه شده و در محیط کشت rmpi کشت داده شدند. سلول ها با غلظت های 31.25، 62.5، 125، 250، 500، 1000 و 2000 میکرومولار از so-d-3 تیمار شدند و میزان زنده مانی آن ها با استفاده از تست mtt طی زمان های 24، 48 و 72 ساعت مورد ارزیابی قرار گرفت. القای آپوپتوز توسط so-d-3 در سلول های سرطانی مورد مطالعه، از طریق فلوسایتومتری بررسی گردید. همچنین سطح پروتئین های hsp70 و casp8 به‫عنوان پروتئین های دخیل در آپوپتوز با استفاده از روش وسترن بلات مطالعه شد. نتایج حاصل با استفاده از نرم افزار spss از نظر آماری تجزیه و تحلیل شدند. نتایج: نتایج حاصل از تست mtt نشان داد که تیمار سلول های سرطانی به‫طور معنی‫داری موجب کاهش زنده مانی این سلول ها نسبت به شاهد می‫شود. میزان ic50 برای سلول های mda-mb-231 به‫طور قابل توجهی کمتر از سلول های mcf7 و 4t1 در 24 ساعت بود (157.4 میکرومولار برای mda-mb-231 در مقایسه با 843.8 میکرومولار برای mcf7 و 1212 میکرومولار برای 4t1). با این حال، تفاوت با افزایش زمان تیمار کاهش یافت (77.47 میکرومولار و 23.38 میکرومولار برای mda-mb-231، 107.3 میکرومولار و 36.69 میکرومولار برای mcf7، و 83.63 میکرومولار و 16.58 میکرومولار برای 4t1 به‫ترتیب در 48 ساعت و 72 ساعت). آنالیز فلوسایتومتری نشان داد که در سلول های تیمار شده با so-d-3، سلول های آپوپتوتیک افزایش معناداری پیدا کرده بودند. بررسی سطح پروتئین ها با استفاده از تکنیک وسترن بلات نیز نشان داد که پروتئین hsp70 در سلول های mcf7 و 4t1 کاهش معناداری داشته است. از طرفی در سلول های 4t1 و mda سطح پروتئین casp8 به طور معناداری افزایش یافته بود. نتیجه گیری: نتایج تحقیق حاضر نشان داد که so-d-3 می تواند به‫طور وابسته به‫زمان موجب مرگ سلول‫های سرطانی پستان شود. آزمایش‫های بعدی نیز نشان داد که so-d-3 این عمل را از طریق القای آپوپتوز اعمال می کند. بنابراین با توجه به نتایج حاصل از تحقیق حاضر، می توان so-d-3 را به‫عنوان یک ترکیب دارای خاصیت ضد سرطانی بالقوه معرفی نمود که قادر است با کاهش hsp70 و تغییر بیان casp8 دخیل در مسیر خارجی آپوپتوزیس، موجب مرگ سلول های سرطانی پستان شود.

investigation of the apoptosis induction potential of synthetic sorafenib-derived compounds in breast cancer cells

aim: cancer is one of the most important diseases of this century, which affects many people all over the world, and while the prevalence of this disease is increasing, no suitable treatment has been found yet. in the meantime, breast cancer is the most common cancer and the leading cause of cancer-related death in women worldwide. in the search for cancer treatment solutions, researchers synthesize numerous medicinal compounds for various cancers and study their effects. sorafenib is a urea multikinase inhibitor which causes apoptosis and inhibits angiogenesis and cancer cell proliferation. this compound is currently used as a treatment for hepatocellular cancer, and tests have also been carried out to verify its performance in treating other cancers. sorafenib derivatives were also synthesized and analyzed. in this research, the anticancer effect of one of the derivatives of sorafenib named (2e,2´e)-2,2´-(1,4-phenylene bis(methanylidene)bis(n-(4-chloro-3-(tri) fluoroethyl (phenyl) hydrazine carboxamide, abbreviated as so-d-3, was evaluated against three breast cancer cell lines. materials and methods: three breast cancer cell lines including mcf7, 4t1 and mda were prepared and cultured in rmpi culture medium. cells were treated with concentrations of 31.25, 62.5, 125, 250, 500, 1000 and 2000 μm of so-d-3, and their survival rates were measured using the mtt test during 24, 48 and 72 hours. the induction of apoptosis by so-d-3 in the studied cancer cells was investigated by flow cytometry. in addition, the level of hsp70 and casp8 proteins as implicated in apoptosis were investigated using the western blot method. the results were statistically analyzed using spss software. results: the results of the mtt test showed that the treatment of cancer cells significantly decreases the survival of these cells compared to the control. the ic50 for mda-mb-231 cells was significantly lower than mcf7 and 4t1 cells at 24 hours (157.4 µm for mda-mb-231 compared to 843.8 µm for mcf7 and 1212 µm for 4t1). however, the difference decreased with increasing treatment time (77.47 μm and 23.38 μm for mda-mb-231, 107.3 μm and 36.69 μm for mcf7, and 83.63 μm and 16.58 μm for 4t1 at 48 hours and 72 hours respectively). flow cytometry analysis revealed that in cells treated with so-d-3, apoptotic cells increased significantly. examination of the protein level using the western blot technique also showed that the hsp70 protein was significantly decreased in mcf7 and 4t1 cells. on the other hand, the level of casp8 protein was significantly increased in 4t1 and mda cells. conclusion: the results of the present study showed that so-d-3 can cause the death of breast cancer cells in a time-dependent manner. subsequent experiments showed that so-d-3 exerts this action through the induction of apoptosis. therefore, according to the results of the present research, so-d-3 can be introduced as a compound with potential anti-cancer properties that can cause cell death by reducing hsp70 and changing the expression of casp8 involved in the external pathway of apoptosis.