اثر داروی ضدافسردگی دولوکستین بر سلول‌های سرتولی tm4: بررسی بیان ژن‫های bax و hdf cx43 ‬‬‬‬‬‬‬‬‬

هدف: از چالش های عمده بشریت افزایش افسردگی و اختلال عملکرد جنسی ناشی از داروهای ضدافسردگی است. با توجه به نقش سلول های سرتولی در اسپرماتوژنز، پژوهش حاضر، اثر داروی دولوکستین را بر زنده مانی، آپوپتوزیس و بیان ژن های bax و (connexin 43) cx43 در سلول های سرتولی بررسی کرده است. مواد و روش‌‌ها: سلول های tm4  در محیط dmem/f12 حاوی %2/5  fbs، 5%  سرم اسب و %1  پنی سیلین-استرپتومایسین کشت شدند. دولوکستین با دوزهای 30،60، 15، 7/5، 3/75 میکروگرم/ میلی لیتر در زمان های 24 تا 72 ساعت روی سلول ها اثر داده شد. آزمون mtt جهت ارزیابی زنده مانی سلول ها، فلوسایتومتری جهت ارزیابی آپوپتوزیس و rt-qpcr جهت بررسی بیان ژن bax  (عامل پیش برندۀ آپوپتوزیس) و cx43 (ضروری برای اسپرماتوژنز) انجام شد. نتایج: دولوکستین در یک الگوی وابسته به دوز و زمان، بقای سلولی را کاهش داد. بر اساس داده های mtt دوز ic50 15 میکروگرم/ میلی لیتر در 48 ساعت محاسبه گردید (p≤0.05). آپوپتوزیس سلول های tm4 نسبت به گروه کنترل در دوز میانه مهاری 15 میکروگرم/ میلی لیتر دولوکستین، افزایش یافت (p≤0.01). rt-qpcr حاکی از افزایش بیان ژن های cx43 (p≤0.05) و bax (p≤0.01) تحت تاثیر دولوکستین بود. نتیجه گیری: با توجه به داده های فلوسایتومتری و افزایش بیان ژن bax، دولوکستین با القای آپوپتوزیس در سلول های سرتولی می تواند عاملی منفی و مخرب در پیشبرد اسپرماتوژنز در نظر گرفته شود. از سوی دیگر، دولوکستین با افزایش سطح بیان ژن cx43، نقل و انتقالات مولکولی توسط اتصالات شکافدار را بین سلول های سرتولی افزایش داده و می‫تواند باعث انتقال سیگنال های پیش برنده آپوپتوزیس به سلول های دودومان اسپرماتوژنیک و در نتیجه کاهش کیفیت اسپرماتوژنز شود.

effect of duloxetine as antidepressant on tm4 sertoli cells: evaluation of bax and cx43 gene expression

aim: one of main challenges in worldwide is increasing rate of depression and sexual dysfunction associated with antidepressant drug consumption. regarding the role of sertoli cells in spermatogenesis, this study investigated the effect of duloxetine on viability, apoptosis and expression of bax and cx43 (connexin 43) expression in sertoli cells.material and methods: tm4 sertoli cells were cultured in dmem/f12 medium containing 2.5% fbs, 5% horse serum and 1% penicillinstreptomycin. cells were treated with different doses of duloxetine (3.75, 7.5, 15, 30, 60 µg/ml) for 24 to 72 hours. mtt assay was performed to evaluate cell viability. the rate of apoptosis was measured by flow cytometry and rtqpcr was performed to evaluate of bax (proapoptotic gene) and cx43 (essential for spermatogenesis) genes.results: duloxetine reduced cell survival in a dose and timedependent manner. on the basis of  mtt  data, ic50 was calculated as 15 μg/ml duloxetine (p≤0.05). tm4 cell apoptosis increased compared to the control group at a dose of 15 μg/ml duloxetine (p≤0.01). rtqpcr results showed increased expression of cx43 (p≤0.05) and bax (p≤0.01) genes under the influence of duloxetine. conclusion: considering the flow cytometry data and the increased expression of bax, duloxetine may induce apoptosis in sertoli cells and may be a negative and destructive factor for spermatogenesis process. on the other hand, by increasing the expression level of cx43 gene, duloxetine increases the molecular communication via gap junctions between sertoli cells and transmits apoptosispromoting signals to spermatogenic cells which can influence spermatogenesis quantification.