ارزیابی اثرات sirna بر سطح بیان ژن snail1 و mir143 در سلول‫های متاستاتیک سرطان سینه‬‬‬‬‬

هدف: در دهه‌های گذشته تلاش های زیادی با هدف جستجوی ابزارهای جدید جهت درمان سرطان صورت گرفته است. در این راستا، کشف، بررسی و کاربرد تکنیک‫های مرتبط با rna های مداخله‌گر کوچک (sirna) یکی از قابل توجه‌ترین پیشرفت‪ها در زمینه شناسایی و درمان سرطان  بوده است. rna  مداخله گر کوچک که گاهی به‏‏عنوان rna مداخله گر کوتاه یا rna خاموش کننده نیز شناخته می‌شود، معمولا 21 جفت باز طول دارد و با تجزیه mrna پس از رونویسی، با بیان ژن‌های خاص با توالی‌های نوکلئوتیدی مکمل تداخل می‌کند و از ترجمه جلوگیری می‌کند. مطالعات بسیاری نشان داده‌اند که sirna ها بر تنظیم بیان برخی ژن‌ها که در سرطان‌ها نقش دارند تاثیرگذار می‌باشند. sirna ها بر فاکتورهای رونویسی  snailکه در تهاجم و متاستاز سلول‌های سرطانی و mir143 که در پاتوژنز سرطان‌ها نقش مهمی دارند موثر هستند. mirna‌ ها همراه با عوامل رونویسی می‌توانند مسیرهای بیولوژیکی دخیل در سرطان‌زایی را مختل ‌کنند. حال آنکه ، اثر دقیق ها sirna بر بیان ژن‌های snail1 و mirna143 در سلول‌های سرطانی سینه کاملا روشن نیست. بر این اساس مطالعه حاضر به بررسی اثراتsirna  بر snail1 و mirna143  بر سلول‌های سرطان سینه پرداخته است.مواد و روشها: در این تحقیق تجربیآزمایشگاهی سلول‌های سرطانی سینه رده mdamb468 انستیتو پاستور ایران خریداری شدند. سلول‌ها در محیط کشت rpmi1640 حاوی 10% fbs کشت داده شدند. جهت تیمار سلول‌های سرطانی با sirna  اختصاصی، کیت ژن  snail1(santacruz biotechnology california, usa) مورد استفاده قرار گرفت. سلول‌ها به دو گروه کنترل (عدم تیمار) و سلول‌های تیمار شده (ترانسفکت شده با sirna) تقسیم‌بندی شدند. به‌منظور مشخص کردن زمان موثر، سلول ها تحت تاثیر دوز 60پیکومول  sirna به‌مدت 24، 48 و 72 ساعت قرار گرفتند. پس از بررسی بیان ژن و به‌دست آمدن زمان موثر در ادامه به‌منظور به‌دست آوردن دوز موثر سلول‌ها با سه دوز 40، 60 و 80 پیکومول تیمار شدند. از ژن بتا اکتین به‌عنوان ژن کنترل داخلی استفاده شد. مورفولوژی سلول‌های متاستاتیک mdamb468 با استفاده از میکروسکوپ نوری قبل و بعد از ترانسفکت ژن اختصاصی مورد بررسی قرار گرفتند. تکثیر سلول‌ها با رنگ آمیزی تریپان بلو بررسی شد. سطح بیان ژن snail1 و mir143 توسط qrtpcr ارزیابی شد. داده‌ها با استفاده از آزمون تی – تست تجزیه و تحلیل شدند.نتایج: در این مطالعه در سلول‌های سرطانی سینه رده mdamb468 سطح نسبی بیان ژن snail1 در زمان موثر 48 ساعت و در مواجهه با دوز موثر 60 پیکومول دچار کاهش معنی‌داری شد (p <0.0001). اما ناک داون ژن snail1 توسط sirna اختصاصی در سلول‌های سرطانی رده  mdamb468درمواجهه با دوز موثر60 پیکومول و زمان موثر 48 ساعت سبب افزایش سطح بیان نسبی ژن mir143 در مقایسه با گروه کنترل شد (p <0.0001). همچنین میزان رشد سلول‌های سرطانی  mdamb468با ناک داون ژن snail1 کاهش پیدا کرد.نتیجه گیری: نتایج حاصل از این پژوهش نشان دادند که ترانسفکت سلول‌های سرطان سینه رده mdamb468 توسط sirna اختصاصی با اثرات کاهشی و افزایشی که بر سطح بیان ژن snail1 و ژن mir143  داشته است می‌تواند به‌طور موفقیت آمیزی سبب کاهش تکثیر و تهاجم سلول‌های سرطان سینه می‌شود.

Evaluation of siRNA Effects on Expression Levels of snail and miR143 in Metastatic Breast Cancer Cells

Aim: In the past decades, many efforts have been made with the aim of searching for new tools to treat cancer. In this regard, the discovery, investigation and application of techniques related to small interfering RNAs (siRNA) has been one of the most significant advances in the field of cancer detection and treatment. Small interfering RNA, sometimes known as short interfering RNA or silencing RNA, is usually 21 bp long and interferes with the expression of specific genes with complementary nucleotide sequences and prevents translation by degrading mRNA after transcription. Many studies have shown that siRNAs affect the regulation of the expression of some genes that play a role in cancers. siRNAs are effective on Snail transcription factors, which play an important role in the invasion and metastasis of cancer cells, and miR143, which plays an important role in the pathogenesis of cancers. miRNAs together with transcription factors can disrupt the biological pathways involved in carcinogenesis. However, the exact effect of siRNA on the expression of snail1 and miRNA143 genes in breast cancer cells is not completely clear. Based on this, the present study investigated the effects of siRNA on snail1 and miRNA143 on breast cancer cells.Material and Methods were purchased from Pasteur Institute of Iran. The cells were cultured in RPMI1640 medium containing 10% FBS. Snail1 gene kit (Santacruz biotechnology, California, USA) was used to treat cancer cells with specific siRNA. The cells were divided into two groups: control (no treatment) and treated cells (transfected with siRNA). In order to determine the effective time, the cells were exposed to a dose of 60 picomoles of siRNA for 24, 48 and 72 hours. Beta actin gene was used as internal control gene. Morphology of MDAMB468 metastatic cells were examined using light microscopy before and after specific gene transfection. Cell proliferation was checked by trypan blue staining. Snail1 and miR143 gene expression levels were evaluated by qRTPCR. Data were analyzed using ttest. Results: In this study, in MDAMB468 breast cancer cells, the relative level of Snail1 gene expression was significantly decreased in the effective time of 48 hours and when exposed to the effective dose of 60 pmol (P < 0.0001). However, the knockdown of Snail1 gene by specific siRNA in MDAMB468 cancer cells when exposed to an effective dose of 60 pmol and an effective time of 48 hours caused an increase in the relative expression level of miR143 gene compared to the control group (P < 0.0001). Also, the growth rate of MDAMB468 cancer cells decreased with Snail1 gene knockdown. Conclusion: The results of this research showed that the transfection of MDAMB468 breast cancer cells by specific siRNA can successfully reduce the expression level of Snail1 gene and miR143 gene. Proliferation and invasion of breast cancer cells.