بیان آنزیم فعال بتا-گلوکورونیداز در بذر گیاه توتون

هدف: طراحی و تهیه سازه ژنی مناسب و انتقال آن به گیاه توتون و بررسی گیاهان تراریخت حاصله بوده است.مواد و روش‌ها: سازه اختصاصی بذر حاوی پیشبرنده napin، توالی ω ، ژن gus و توالی sar در پلاسمید pbi121 طراحی و تهیه و در باکتری e. coli تکثیر شد. ریزنمونه‌های برگی توتون با آگروباکتریوم سویه lba4404 به‫روش استاندارد تلقیح شدند. گزینش جوانه‌های باززایی شده در محیط انتخابی (شامل ms، mg/l  0/1 naa،  mg/l3 bap ،mg/l 25 کانامایسین، mg/l 200 سفوتاکسیم) انجام شد. آنالیز گیاهان تراریخت با pcr، rt-pcr و آزمون هیستوشیمیایی انجام شد.نتایج: بررسی مولکولی گیاهان باززایی شده با pcr و آغازگرهای اختصاصی ژن‌های nptii و gus نشان‌دهنده انتقال این ژن‌ها به گیاه‫چه‌های باززایی شده بود. نتایج rt-pcr نشان داد که نسخه‌برداری از ژن nptii در هر دو بافت برگ و بذر صورت می‌گیرد در حالیکه نسخه‌برداری از ژن gus تنها در بذر صورت می‌گیرد. با توجه به اینکه پیشبرنده nos (کنترل‌کننده ژن nptii) عمومی و napin (کنترل‌کننده ژن gus) یک پیشبرنده اختصاصی بذر می‌باشد، این نتیجه مورد انتظار بود. در نهایت با استفاده از sds-page و آزمون هیستوشیمیایی، تولید و فعالیت آنزیم بتاگلوکورونیداز در بذر گیاهان تراریخت تائید شد.نتیجه‌گیری: نتایج مناسب بودن سازه ژنی طراحی شده را نشان داد، چرا که پیشبرنده napin به خوبی موجب بیان اختصاصی ژن gus در بذر شده و توالی امگا نیز در افزایش بیان تراژن موثر بوده است. در ادامه کار می‌توان این سازه را با جایگزینی ژن‌های ارزشمند با ژن  gusبرای تولید پروتئینهای نوترکیب استفاده نمود.