جداسازی باسیلوس سریوس تولید کننده α-آمیلاز از ریزوسفر درختان پرتقال

سابقه و هدف: : باکتری های موجود در ناحیه ریزوسفر با محلول نمودن فسفات و تولید ترکیباتی از قبیل فیتوهورمون ها و ترشح آنزیم هایی مانند ?-آمیلاز و کیتیناز به رشد گیاهان کمک می‌نمایند. این مطالعه با هدف جداسازی و شناسایی باسیلوس‌های تولید کننده ?-آمیلاز از ریزوسفر درختان پرتقال و نیز ارزیابی تولید و فعالیت ?-آمیلاز در حضور منابع مختلف کربن و دامنه های مختلف ph انجام شد. مواد و روش ها: این پژوهش به صورت مقطعی به منظور جداسازی باسیلوس های تولید کننده ?-آمیلاز از ریزوسفر باغات پرتقال دلفارد در استان کرمان انجام شد. پس از جمع آوری نمونه، به منظور جداسازی باکتری از محیط آگار حاوی نشاسته استفاده گردید. از آزمون‌های بیوشیمیایی و مولکولی تعیین توالی ناحیه 16s rrna برای شناسایی دقیق سویه مورد نظر استفاده شد. به منظور بررسی فعالیت آمیلازی از تست سریع هیدرولیز نشاسته استفاده گردید. همچنین تولید آنزیم در حضور منابع مختلف کربن شامل گلوکز، فروکتوز و نشاسته مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: پس از شناسایی بیوشیمیایی و تعیین توالی سویه برتر تولید کننده آنزیم با عنوان باسیلوس سریوس سویه mr-r3 با شماره دستیابی kc306945.1 در بانک جهانی ژن ثبت گردید. همچنین نتایج نشان داد که نشاسته و گلوکز بیشترین اثر مثبت بر تولید آنزیم ?-آمیلاز را در غلظت 5/0 گرم بر لیتر و فروکتوز بیشترین اثر را در غلظت 25/0 گرم بر لیتر دارا می‌باشند. نتیجه گیری: با توجه به کفایت مناسب تولید ?-آمیلاز سویه جداشده در شرایط آزمایشگاهی، انجام مطالعات های گسترده تر در حد بالاتر به منظور شناسایی دقیق تر ویژگی های آنزیمی آن پیشنهاد می گردد. background and objectives: rhizosphere bacteria assist growth of plants via dissolving phosphate, production of special compounds such as phytohormones and release of hydrolytic enzymes such as a-amylase and kitinase. this study aimed to isolate and to identify a a-amylase producing bacillus in rhizosphere of orange orchards and to investigate microbial activity to enzyme production in presence of different source of carbon ranges. materials and methods: this study was conducted in order to isolation of a-amylase bacilli from rhizosphere of orange orchards located at kerman province, iran. after sample collection, bacteria were isolated by growing on starch agar. several molecular (based on 16srrna) and biochemical methods were used to identify bacterial species. the starch rapid hydrolysis test was used to investigate amylase activity of the isolates. additionally, the enzyme production level was studied in the presence of several carbon sources include glucose, fructose and starch ranges. results: molecular and biochemical analysis showed that isolated bacterium is a strain of bacillus cereus named as bacillus cereus mr-r3 and recorded in genebank under accession number of kc306945.1. moreover, results showed that starch and glucose have the highest positive effects on alpha amylase production in the presence of 0.5 g/l and fructose have the highest effect in the presence of 0.25 g/l. conclusion: isolation and identification of orange orchards rhizospher-derived bacillus species considering their ability to produce a-amylase and phosphate solvation showed that the presence of this species in this region is very important. moreover, increase in production of the enzyme after treatment with different carbon sources can be related to their gene expression induction effects.