استفاده از دو شاتل وکتور درکلون سازی و بیان ژن اینترلوکین 11 در باسیلوس سوبتیلیس

سابقه و هدف: در بیماران سرطانی که تحت شیمی درمانی قرار می‌گیرند پلاکت خونشان پایین می‌آید اینترلوکین 11، یک سایتوکین افزاینده پلاکت خون است. اینترلوکین 11 نوترکیب انسانی، تنها دارویی است که برای درمان اثرات ناشی از شیمی درمانی تایید شده است. در این تحقیق از دو شاتل وکتور pht43 و pmr12 جهت کلون کردن و بیان ژن اینترلوکین 11در باسیلوس سوبتیلیس استفاده شد و میزان بیان در این دو وکتور بررسی گردید.مواد و روش ها: در این مطالعه ژن اینترلوکین 11 به صورت ساختاری بسته با دو جایگاه برشbamhi  وxbal  با اندازه نهایی bp609 طراحی و سنتز شد. سپس این ژن بر روی شاتل وکتورهای pht43 و pmr12 کلون و به باکتری باسیلوس سوبتیلیس wb600 انتقال یافت. میزان بیان پروتین نوترکیب اینترلوکین 11 بوسیله معرف بردفورد مورد بررسی قرار گرفت.یافته ها: با روشpcr  وجود ژن اینترلوکین 11 را بر روی شاتل وکتورهای pht43 و pmr12 نشان می‌دهد. میزان بیان توسط باکتری حاملpmr12-int11  پس از 9 ساعت انکوباسیون بیشترین میزان یعنی حدود µg/ml 75  و باکتری حامل pht43-int11 پس از 4 ساعت، به میزانµg/ml 61/4  بوده است.نتیجه گیری: میزان بیان پروتین نوترکیب اینترلوکین 11 با استفاده از وکتور pmr12 نسبت به وکتور pht43 بیشتر می‌باشد و تاکنون چنین میزان بیانی برای اینترلوکین 11 گزارش نشده است. باسیلوس سوبتیلیس قادر به بیان و تولید پروتین اینترلوکین 11 می‌باشد و می‌توان از آن به عنوان یک میزبان مناسب برای تولید دارو استفاده نمود.

Investigation of two Shuttle Vectors for Cloning and Expression of IL-11 Gene in Bacillus subtilis

Background Objectives: The recombinant human IL-11 is the only approved medicine used for treating chemotherapy-induced side effects. Platelet count decreases (thrombocytopenia) in cancer patients who undergo chemotherapy. Interleukin-11 (IL-11) is a platelet increasing cytokine. This study aimed to use two shuttle vectors of pHT43 and pMR12 for cloning the IL-11 gene and     expression of its protein in Bacillus. subtilis and the expression level in these two vectors was   investigated.Materials Methods: In this study, the IL-11 gene was designed and synthesized as a closed structure with two restriction sites for BamH1 and XbaI enzymes and a final length of 609 bp. Then the gene was cloned in two shuttle vectors of pHT43 and pMR12 and transferred to            B. subtilis WB 600. The expression level of the recombinant IL-11 was evaluated with the      Bradford incubation, the pMR12-int11-carrying bacteria expressed higher levels of the protein          (75 µg/mL) than pHT43-int11-carrying bacteria.Results: The results of PCR indicated that the IL-11 gene existed in shuttle vectors pHT43 and pMR12. The expression of this protein was about 75 /g / mL using pMR12 vector, which is higher than the bacterium carrying pHT43-int11.Conclusion: The expression level of the recombinant IL-11 protein with pMR12 vector was higher than pHT43 vector. This amount has not been reported so far for IL-11. B. subtilis can express and produce IL-11 and can be used as a source for drug production