Isolation and Molecular Identification of Avibacterium Paragallinarum Isolated From Commercial Layer and Backyard Chickens in Iran

Background: avibacterium paragallinarum causes infectious coryza that is an important disease of chickens associated with an acute upper respiratory infection, growth retardation, marked drop in egg production, reduced hatchability, and increased number of culls. infectious coryza has been reported from all around the world including iran where chickens are raised. objectives: this study was conducted to isolate avibacterium paragallinarum from the suspected cases of infectious coryza in the backyard and commercial layer chickens in three provinces of tehran, alborz, and qazvin in iran, to characterize the isolates by molecular methods and to determine their antimicrobial susceptibility profile. methods: swab samples from eye secretions and mouth cavity were provided from five commercial laying farms (25 samples) and backyard chickens (20 samples) suspected of infectious coryza in tehran, alborz, and qazvin provinces of iran. standard bacteriological and biochemical procedures were performed for the isolation and identification of av. paragallinarum. the antimicrobial susceptibility of the recovered isolates was determined by the agar disk diffusion method. hpg-2 pcr was used to confirm av. paragallinarum using the specific primers of n1 and r1, resulting in a 500 bp amplicon. pcr-amplified hmtp210 gene with the amplicon size of 1.6 kb was subjected to sequencing with the standard sanger sequencing method and phylogenetically analyzed. results: three av. paragallinarum isolates were obtained from all the cultured samples. antimicrobial sensitivity test revealed that all three isolates were resistant to amoxicillin, oxytetracycline, streptomycin, ampicillin, and colistin while they were susceptible to cephalexin, ceftriaxone, florfenicol, gentamicin, linco-spectin, neomycin, and doxycycline. in phylogenetic analysis, two different genotypes of av. paragallinarum were found. conclusions: in this study, av. paragallinarum isolates recovered from layer flocks were genotypically closely related to the strains from serovar c while the isolate recovered from backyard chickens was closely related to serovar b strains. our results showed that the antimicrobial susceptibility is highly variable among the av. paragallinarum isolates compared to previous studies. future studies are required to develop better immunogenic strategies and eventually novel vaccine candidates to control the disease and reduce the risk of infection with multidrug resistant av. paragallinarum isolates.

جداسازی و شناسائی مولکولی آوی‌باکتریوم پاراگالیناروم جدا شده از مرغان بومی و تخم‌گذار تجاری در ایران

زمینه مطالعه: آوی‌باکتریوم پاراگالیناروم باعث ایجاد کوریزای عفونی می‌شود که بیماری مهمی در طیور است که با عفونت حاد تنفسی فوقانی، کاهش رشد، افزایش تعداد وازده‌ها، کاهش قابل توجه تولید تخم مرغ و هچ همراه است. کوریزای عفونی در سراسر نقاط جهان که دارای صنعت پرورش طیور است از جمله ایران گزارش شده است.هدف: این مطالعه برای جداسازی آوی‌باکتریوم پاراگالیناروم از موارد کوریزای عفونی در مرغان بومی و تخم‌گذار تجاری در استان‌های تهران، البرز و قزوین، تعیین خصوصیات جدایه‌ها با روش‌های مولکولی و تعیین حساسیت ضد‌میکروبی جدایه‌ها انجام شد. روش‌ کار: نمونه‌های سواب از ترشحات چشم و حفره دهان از پنج مزرعه تخم‌گذار تجاری (25 نمونه) و مرغان بومی (20 نمونه) مشکوک به کوریزای عفونی در استان‌های تهران، البرز و قزوین تهیه شد. این نمونه‌ها با روش‌های استاندارد باکتریشناسی و بیوشیمیایی برای جداسازی و شناسایی آوی‌باکتریوم پاراگالیناروم انجام گرفت. حساسیت ضد‌میکروبی جدایه‌ها با روش آگار دیسک دیفیوژن تعیین شد. برای تائید آوی‌باکتریوم پاراگالیناروم، از HPG2 PCR از پرایمرهای اختصاصی N1 و R1 استفاده شد که منجر به تولید فراورده‌ای با 500 جفت باز می‌شود. ژن hmtp210 جدایه‌ها با استفاده از پرایمرهای اختصاصی با روش PCR افزوده‌سازی شدند و فراورده ای یا اندازه 6/1 کیلوباز تولید نمودند که با روش توالی‌یابی استاندارد سنگر تعیین توالی و مورد تجزیه و تحلیل فیلوژنتیکی قرار گرفتند.نتایج: در مجموع، سه نمونه آوی‌باکتریوم پاراگالیناروم از تمامی نمونه‌های کشت‌شده به ‌دست آمد. حساسیت ضدمیکروبی نشان داد که هر سه نمونه به آموکسی سیلین، اکسی تتراسایکلین، استرپتومایسین، آمپی سیلین و کلیستین مقاوم و همگی به سفالکسین، سفتریاکسون، فلورفنیکل، جنتامایسین، لینکواسپکتین، نئومایسین و داکسی سیکلین حساس بودند. در آنالیز فیلوژنتیک، دو ژنوتیپ مختلف آوی‌باکتریوم پاراگالیناروم مشخص شد. نتیجه‌گیری: یافته های این مطالعه نشان داد که از نظر ژنوتیپی جدایه‌های آوی‌باکتریوم پاراگالیناروم بدست‌آمده از مرغان تخم‌گذار تجاری به سویه‌های سرووار C بسیار نزدیک بودند در حالیکه جدایه بدست‌آمده از مرغان بومی به سویه‌های سرووارB ارتباط نزدیک داشتند. حساسیت ضدمیکروبی در مقایسه با مطالعات مشابه بسیار متنوع بود. مطالعات آینده برای توسعه استراتژی‌های ایمنی زایی بهتر و در نهایت واکسن‌های جدید برای کنترل بیماری و کاهش خطر عفونت به جدایه‌های با مقاومت چند‌گانه آوی‌باکتریوم پاراگالیناروم مورد نیاز است.