evaluation of a multiplex polymerase chain reaction for the simultaneous detection of vibrio spp. in vegetables and water

Background: several foodborne outbreaks associated with the consumption of vegetables have been reported which involved vibrio spp. as causative agents. conventional methods of detecting these microorganisms are time-consuming. therefore, the development of techniques for rapid detection seems to be of paramount importance. objectives: the present study recommends a rapid and reliable method for the detection of vibrio cholera (v. chol-era), v. parahaemolyticus, v. vulnificus, and v. alginolyticus. moreover, the results are compared with the conventional plate culture method. methods: the conventional bacteriological tests were conducted to detect vibrio spp. in vegetables and their surrounding water. the samples were also subjected to a newly developed multiplex polymerase chain reaction (pcr) using five specific genes, including vc-rmm of v. cholerae, vp-mmr of v. parahaemolyticus, vv-rmm of v. vulnificus, v.al2-mmr of v. alginolyticus, and vm-f for all the four isolates. results: the presence of v. alginolyticus and v. vulnificus was confirmed by amplifying the specific regions of 412 bp for v. vulnificus and 144 bp for v. alginolyticus. the results demonstrated that v. cholerae and v. parahaemolyticus were not detected in multiplex pcr, which was consistent with the findings of conventional plating methods. conclusions: obtained results revealed that the designed multiplex pcr assay is a reliable, rapid, and cost-effective method for the simultaneous detection of vibrio spp.

ارزیابی یک روش مالتیپلکس پی سی آر به منظور تشخیص هم زمان گونه‌های ویبریو در سبزیجات و آب

زمینه مطالعه:  طغیان‌های غذازاد متعددی مرتبط با مصرف سبزیجات گزارش شده‌اند که گونه‌های ویبریو، عامل ایجاد آنها بوده‌اند. به دلیل اینکه روش‌های رایج تشخیصی، زمان‌بر هستند، تشخیص سریع این میکروارگانیسم‌ها، اهمیت بالایی دارد.   هدف: مطالعه حاضر، روشی سریع و قابل اعتماد را برای شناسایی ویبریو کلرا، ویبریو پاراهمولیتیکوس، ویبریو وولنیفکوس و ویبریو آلجینولیتیکوس ارائه می‌دهد و نتایج این روش را با نتایج روش‌های رایج کشت، مقایسه می‌کند. روش کار: تست‌های رایج باکتریولوژیک انجام شدند تا گونه‌های ویبریو را در سبزیجات و آبی که آنها را احاطه می‌کند مورد بررسی قرار دهند. نمونه‌های همچنین تحت مالتیپلکس پی سی آر قرار گرفتند که در این روش از پنج ژن استفاده شد که شامل VCRmm برای ویبریو کلرا، VPMmR برای ویبریو پاراهمولیتیکوس، VVRmm  برای ویبریو وولنیفکوس، V.al2Mmr  برای ویبریو آلجینولیتیکوس و VMF برای هر چهار ایزوله بودند. نتایج:  حضور ویبریو آلجینولیتیکوس و ویبریو وولنیفکوس توسط محل‌های اختصاصی تقویت‌کنندگی (412bp برای ویبریو وولنیفیکوس و 144bp  برای ویبریو آلجینولیتیکوس) تأیید شدند. ویبریو کلرا و ویبریو پاراهمولیتیکوس توسط مالتیپلکس پی سی آر شناسایی نشدند که این یافته با نتایج روش‌های کشت متداول، مطابقت داشت. نتیجه گیری نهایی: نتایج به دست آمده، نشان داد که مالتیپلکس پی سی آر طراحی شده در این مطالعه، روشی قابل اعتماد، سریع و مقرون به صرفه برای شناسایی هم زمان گونه‌های ویبریو است.