بهینه سازی و بیان ژن طراحی شده stxA واجد سه جهش هدفمند (E167Q-A231D-G234E) شیگلا دیسانتری و تخلیص آن

شیگلا دیسانتری با تولید سم stx (با دو زیر واحد aوb) یکی از مهم‌ترین‌، باکتری های بیماری زا‌ی روده ای برای انسان است. این سم با ورود به سلول های اپیتلیال باعث مهار سنتز پروتیین و مرگ سلولی خواهد شد. علیرغم مطالعات فراوان جهت تولید واکسن ، هنوز ضرورت تداوم مطالعه در دست‌یابی به پروتیین نوتر یب از نوع stxa وجود دارد. هدف از این مطالعه، طراحی ژن stxa جهش یافته و تولید پروتیین بیانی آن به عنوان کاندید واکسن علیه شیگاتو کسین جهت بررسی ایمنی زایی آن در مطالعات بعدی می باشد. پس از طراحی و تهیه ژن صناعی pet28a-stxa جهش یافته (g234e- e167q -a231d) ، واکنش pcr جهت کنترل صحت حضور این ژن انجام گردید. پس از انتقال این وکتور به سلول میزبان e. coli bl21 ، بیان، بهینه سازی، تخلیص و درنهایت تایید پروتیین حاصل بررسی گردید. نتیجه مطالعات اولیه، منجر به طراحی ژن stxa جهش یافته گردید. نتایج واکنش pcr با استفاده از پلاسمید سنتتیک نشان از صحت ژن مورد مطالعه داشت. سپس بیان این ژن در سلول میزبان e. coli bl21، بهینه سازی گردید که در نتیجه تولید مقادیر زیادی از این پروتیین به شکل اجسام توده‌ای نشان داده شد. تخلیص اجسام توده‌ای و سپس محلول سازی پروتیین‌های آن از روش‌های تلفیقی صورت گرفت. با توجه به مکانیسم اثر شیگاتوکسین پیش بینی می شود که این پروتیین جهش یافته دارای اثر سمیت کم‌تری نسبت به سایر جهش یافته های قبلی کاندید واکسن داشته باشد، و در نتیجه بتواند به عنوان کاندید واکسن برتر مطرح گردد.