ایمنی‌زایی پروتئین کایمر نوترکیب stxb-intimin- escc علیه بیماری‌زایی باکتری enterohemorrhagic escherichia coli o157:h7

انتروهموراژیک اشریشیا کلی سروتیپ o157:h7 یک‌ عامل بیماری‌زای مهم در بین انسان و حیوانات است که باعث عارضه‌های گوارشی متعددی از جمله کولیت هموراژیک و در موارد حاد سندرم اورمی همولیتیک (hus) می‌شود. با توجه به خطرات ناشی از درمان آنتی‌بیوتیک‌ها در عفونت e.coli o157:h7، واکسن‌ها روشی امیدبخش برای پیشگیر‌‌ی از این عفونت را ارائه می‌کنند. هدف از این تحقیق بررسی ایمنی‌زایی آنتی‌ژن کایمر (sei) stxb-escc-intimin علیه باکتری e.coli o157:h7 بود. بیان پروتئین نوترکیب تحت تاثیر iptg در e.coli bl21 de3 القاء و توسط sds-page ارزیابی شد. پروتئین نوترکیب با ستون کروماتوگرافی تمایلی ni-nta خالص و به روش الایزا با استفاده از آنتی‌بادی اختصاصی ضد توکسین شیگا تایید گردید. ایمنی‌زایی در موش با پروتئین خالص انجام و تیتر آنتی‌بادی به روش elisa تعیین شد. ریزش باکتری و مرگ و میر در موش‌ها مورد بررسی قرار گرفت. بررسی آماری با آزمون‌‌های دانکن و t-test با نرم‌افزار spss انجام شد. بیان پروتئین با وزن مولکولی 5/74 کیلو دالتون در sds-page مشاهده شد. حداقل مقدار آنتی‌ژن شناسایی شده با آنتی‌بادی مرغی ضد شبه شیگا با استفاده از روش elisa 156نانوگرم بود. ریزش باکتری در موش ایمن تا cfu/ml 102 کاهش یافت و 80 درصد از موش‌های ایمن پس از تزریق ld5010 از باکتری زنده ماندند. نتایج نشان داد که پروتئین نوترکیب کایمر می‌‌تواند کاندید واکسن مناسبی علیه e.coli o157:h7 باشد.

immunogenicity of the recombinant chimeric protein stxb-intimin- escc against pathogenicity of enterohemorrhagic escherichia coli o157:h7

enterohemorrhagic escherichia coli serotype o157:h7 is an important pathogen in humans and animals that causes a number of gastrointestinal complications, including the hemorrhagic colitis and in acute cases, the hemolytic uremic syndrome (hus). considering the risks of antibiotic treatments, vaccines provide a promising way to prevent this infection. the aim of this study was to evaluate the immunogenicity of chimeric antigen stxb-escc-intimin (sei) against e.coli o157: h7. a recombinant chimeric protein expression was induced by iptg in e.coli bl21 de3 and evaluated by sds-page. the recombinant protein was purified by ni-nta affinity chromatography. the purified protein was confirmed by elisa using anti shiga toxin specific antibodies. immunization was performed in mice with pure protein and the antibody titer was determined by elisa. bacterial shedding and mortality in mice were examined. statistical analysis was performed by duncan tests and t-test with spss software. expression of a protein with a molecular weight of 74/5 kda was observed in sds-page. the minimum amount of detected antigen with anti shiga-like poultry antibody using elisa method was 0.156 μg. bacterial shedding in immunized mice was reduced to 102 cfu/ml, and 80% of the immunized mice survived the bacterial injection of 10ld50. the results showed that the recombinant chimeric protein could be a suitable vaccine candidate against e. coli o157: h7.