مطالعه ویژگی های فنوتیپی، ژنوتیپی و دامنه میزبانی استرین های pseudomonas savastanoi، عامل گال زیتون و خرزهره

برای مطالعه خصوصیات فنوتیپی، مولکولی، بیماری‌زایی و فیلوژنتیکی عوامل باکتریایی گال‌های زیتون و خرزهره، نمونه‌هایی از برگ، دمبرگ، شاخه و تنه این درختان که دارای علائم گره یا گال بودند، از شهرستان‎های مختلف استان‎های مازندران، گیلان، قزوین و تهران جمع‌آوری و به آزمایشگاه منتقل شد. از محیط‌کشت kings’b برای جداسازی استفاده شد و 180 استرین از گال های خرزهره و 15 استرین از گال های زیتون خالص سازی شدند. آزمون بیماری زایی استرین های جداشده از گال زیتون و گال خرزهره نشان داد. 14 استرین جد اشده از زیتون و 18 استرین جد اشده از خرزهره روی میزبان اصلی خود بیماری زا بودند. به علاوه استرین های خرزهره روی شاخه های جوان زیتون نیز بیماری زا هستند، در صورتی که استرین های زیتون روی خرزهره بیماری زا نبودند. تمامی استرین ها گرم منفی، کاتالاز مثبت و هوازی اجباری بودند و توانایی تولید رنگدانه فلورسنت را روی محیط کشت king’s b داشتند. در آزمون‌های lopat، تولید لوان، آنزیم اکسیداز، آنزیم آرژنین‌دی‌هیدرولاز و پوسیدگی سیب‌زمینی، منفی و در آزمون فوق‌حساسیت در توتون و شمعدانی مثبت بودند. واکنش پی سی آر با استفاده از آغازگرهای اختصاصی عوامل گال زیتون (psvf/psvr) و خرزهره (psnf/psnr)روی استرین های دارای توانایی ایجاد فوق حساسیت در توتون انجام شد و به ترتیب در 14 استرین از نمونه های گال زیتون و 18 استرین از نمونه های گال خرزهره قطعه مورد نظر به اندازه 388 و 349 جفت باز تکثیر شد. استرین ها براساس ویژگی‌های فنوتیپی، بیماری‎زایی و استفاده از آغازگرهای اختصاصی به‎ترتیب، pseudomonas savastanoi pv. savastanoi و p. savastanoi pv. nerii شناسایی شدند. برای تعیین دقیق جایگاه تاکسونومیکی استرین ها از روش تجزیه و تحلیل توالی چند ژنگاهی (mlsa) با تکثیر و توالی‌یابی قطعه‎ ای از سه ژن خانه‌دار rpob، rpod و gyrb استفاده شد. درخت‎ فیلوژنی براساس بیشینه تشابه (maximum likelihood) توالی سلسه ای با 1000 تکرار (bootstrap) ترسیم شد استرین های مورد مطالعه بدون تمایز و تفکیک در یک گروه در کنار استرین های پاتوتیپ قرار گرفتند. هرچند درخت های فیلوژنی مبتنی بر توالی ژن های gyrb و rpob نتوانست استرین‎ های psv و psn را از هم تفکیک کند، البته درخت فیلوژنی رسم‎ شده بر اساس ژن rpod استرین‎های psv و psn را از هم تفکیک کرد.

phenotypic and genotypic characteristics and host range of pseudomonas savastanoi strains, the causal agents of olive and oleander trees

olive (olea europaea) as an oily plant and oleander (nerium oleander) as an ornamental and evergreen shrub are gorwn in iran. olive and oleander knot diseases are caused by pseudomonas savastanoi pv. savastanoi (psv) and p. savastanoi pv. nerii, respectively. oleander gall samples were collected from mazandaran province and olives knots were received from guilan and qazvin provinces. symptoms including swollen lumps with a spongy, irregular appearance were observed on various host tissues, including petioles, branches, twigs, trunks, and leaflets. fluorescent pigment colonies were appeared on king’s b medium after 48 hours incubation at 28°c. pathogenicity of 14 and 18 strains among 150 and 180 isolated strains were confirmed on two years old olive and oleander trees, respectively. moreover, four strains isolated from oleander were able to induce gall on olive trees. all strains were gram-negative and catalase-positive. strains were negative for levan production, oxidase, potato rot, and arginine dihydrolase activities and positive in production of hypersensivity reaction on tobacco. the 388 and 349 bp products were amplified in pcr using psvf/r and psnf/r primer pairs in psv and psn strains, respectively. phylogenetic analyses based on the sequence of three house-keeping genes including rpob, rpod, and gyrb indicated that representative strains grouped with p. savastanoi pathovars.