همسانه‌سازی ژن Hsp70 مایکوباکتریوم اویوم تحت‌گونه پاراتوبرکلوزیس در پلاسمید Pet-24a و بیان آن در باکتری اشریشیا‌ کولای

بیماری یون (پاراتوبرکلوزیس) ناشی از باکتری مایکوباکتریوم اویوم پاراتوبرکلوزیس (mycobacterium avium paratuberculosis; map) عفونت مزمن و پیشرونده ای بوده و به طور عمده نشخوارکنندگان را درگیر می سازد. این بیماری می تواند خسارات اقتصادی فراوانی را به صنعت دامپروری وارد سازد و ممکن است تهدیدی نیز برای بهداشت عمومی باشد، چون با انتقال از راه شیر و دیگر فراورده های دامی آلوده ممکن است انسان را نیز آلوده نماید. مقاومت و ایمنی در برابر بیماری یون، بیش تر به پاسخ ایمنی با واسطۀ سلولی مرتبط است. پروتئین شوک حرارتی 70 (heat shock protein70; hsp70) باکتری فوق، یکی از پروتئین های مهم آن می باشد که پاسخ ضد آن از دفع مدفوعی باکتری جلوگیری می کند. به‌منظور فراهم سازی تولید واکسن نوترکیب جهت مقابله با بیماری یون، در این مطالعه تولید hsp نوترکیب (recombinat hsp; rhsp) و بررسی ایمنی زایی آن در خرگوش مورد بررسی قرار گرفت. بدین منظور ژن hsp70 در پلاسمید pet-24a همسانه سازی گردید و پلاسمید نوترکیب حاصله به سویۀ bl21 باکتری اشریشیا کولای منتقل شد. بیان پروتئین فوق با استفاده از sds-page بررسی و صحت توالی نوکلئوتیدی با تعیین توالی، تایید گردید. تزریق rhsp70 به خرگوش با تولید سطح بالایی از آنتی بادی ضدِّ آن همراه بود. بر اساس یافته ها، به نظر می رسد که آنتی بادی ضد rhsp70 را می توان در طراحی روش های تشخیصی بیماری و پروتئین نوترکیب تولیدشده را جهت تولید واکسن های نوترکیب مورد ارزیابی قرار داد.

cloning of mycobacterium avium paratuberculosis hsp70 gene into pet-24a plasmid and its expression in escherichia coli

johne’s disease (paratuberculosis) is a disease caused by mycobacterium avium paratuberculosis (map) which is a chronic and progressive infection that chiefly affects ruminants. the disease can lead to significant economic losses in the livestock industry and may also be a threat for public health; because it may be transmitted to humans through consumption of milk and other contaminated animal products. immunity and resistance against the johne’s disease is mainly due to cell mediated immune response. heat shock protein 70 (hsp70) of this bacterium is one of its important proteins, which the immune response against it can prevent the fecal excretion of bacteria. in order to facilitate the production of recombinant vaccine against johne’s disease, in this study the recombinant hsp (recombinant hsp; rhsp) was produced and its immunogenicity investigated in rabbits. for this purpose, the hsp70 gene was cloned into pet-24a plasmid and the resulting recombinant plasmid was transferred to e. coli strain bl21. the expression of the above protein was checked by sds-page and the accuracy of the nucleotide sequence was confirmed by sequencing. immunization of rabbits by rhsp70 resulted in the production of high levels of antibodies. based on the findings, it seems that the hsp70 specific antibody can be evaluated in the design of diagnostic methods of the disease and the produced recombinant protein can be assessed for the production of recombinant vaccines.