production and application of a monoclonal antibody based peroxidase conjugate for detection of chicken igg antibodies in elisa

Viral infections are the cause of great economic losses in the poultry industry. development of appropriate reagents and serological diagnostic kits will help to control these infections. the aim of this study is to prepare a peroxidase labeled antichicken igg using a mab (5b8) against chicken igg, for detection of chicken antibodies in elisa. hybridoma cells producing the mab 5b8 were cultured in rpmi 1640 medium and the mab was purified from the cells supernatant using a sepharose matrix column, sensitized with chicken igg. the purified mab was labeled with horseradish peroxidase (hrp) by periodate treatment. the peroxidase labeled mab was compared with a commercial polyclonal product for detection of chicken antibodies against avian influenza virus nucleoprotein in elisa. therefore, type a recombinant nucleoprotein influenza virus was used as the antigen and chicken sera prepared from healthy and influenza virus infected chickens were used as primary antibodies. the results showed that there is a strong and direct correlation (r =0.972) between the optical densities of a commercial antichicken igg and the prepared conjugate. in conclusion, the conjugated mab is appropriate for the development of serological diagnostic tests for poultry infections.

IgG تولید و کاربرد کونژوگه پراکسیداز آنتیبادی مونوکلونال به منظور تشخیص ELISAتوسط

عفونت های ویروسی عامل خسارتهای اقتصادی بسیار زیادی در صنعت طیور هستند. تولید مواد و کیت های تشخیص سرولوژیک مناسب بهه مهر،، بها اسهتفاده از یهک IgG کنترل این عفونت ها کمک خواهد نمود. هدف از مطالعهی حاضر تهیه یک آنتی بادی نشاندار شده با پراکسیداز ضد )، برای ردیابی آنتی بادی های مر، در الیزا بود. برای این منظور تیره سلول هیبریهدومای تولیهد کننهدهی 5B8 مر، (IgGآنتی بادی منوکلونال ضد IgG کشت داده شد و آنتی بادی منوکلونال با استفاده از یک ستون حاوی سفارز حساس شده با RPMI 1640 در محیط 5B8 آنتیبادی مونوکلونال مر، از مایع رویی سلولها خالص شد. آنتیبادی خالص شده با روش پریودات با آنزیم پراکسیداز نشاندار گردید. آنتیبادی منوکلونال نشاندار شهده بها پراکسیداز از نظر شناسایی آنتی بادی ضد نوکلئوپروتئین ویروس آنفلونزا در الیزا با یک آنتی بادی پلهی کلونهال ترهاری مقایسهه گردیهد. بنهابر ایهن به عنوان آنتی ژن و سرم های تهیه شده از مر، های سالم و مر، های آلوده به ویروس آنفلهوآنزا بهه عنهوان Aنوکلئوپروتئین ویروس آنفلونزا تیپ ) بین دانسیته های نهوری آنتهی r =0.972آنتی بادی اولیه مورد استفاده قرار گرفتند. نتایج بدست آمده نشان داد که یک همبستگی قوی و مستقیم ( مر، و آنتی بادی نشاندار شده وجود دارد. در نتیره آنتی بادی منوکلونال نشاندار شده برای طراحی کیتهای تشخیص سرمی IgGبادی تراری ضد طیور مناسب می باشد.