isolation and culturing myogenic satellite cells from ovine skeletal muscle

Sheep satellite cells more than satellite cells of the rat and mouse are similar to human satellite cells. these cells are widely used in the modeling and treatment of diseases like heart insufficiency, neurological diseases, muscular dystrophy, cerebral cell transplantation for the treatment of migraines, screening, and the production of new drugs. this study was aimed to isolate and culture primary satellite cells (pscs) obtained from sheep fetus, and perform clonal expansion of transfected pscs. skeletal muscle tissues of hind limbswere collected from sheep fetuses obtained from a local abattoir. after enzymatic digestion, flasks were replaced after 3 hours to isolate non-myogenic cells, such as fibroblasts. after six days, the cells were differentiated to myoblasts. using a differentiation medium containing the horse serum, myotube cells were observed in the flask, indicating that the cultured cells were satellite cells. the mrna expression of the pax7 gene was used to confirm the presence of satellite cells. in addition, the results showed that satellite cells grow in a culture medium containing 5% fbs without differentiation, while 10% fbs initiates their differentiation.

خالص سازی و کشت سلول های رده ی سلولی سلول های ماهواره ای عضلانی گوسفند

از آنجایی که سلول‌های ماهواره‌ای گوسفند از لحاظ طول‌ عمر، تکثیر، تمایز و متابولیسم شباهت بسیاری به سلول‌های ماهواره‌ای انسان نسبت به سلول‌های رت و موش دارد، مورد توجه قرار گرفتند. بازسازی ماهیچه های اسکلتی در پاسخ به جراحات، از طریق تلفیق سلول های ماهواره ای انجام می گیرد. این سلول ها کاربرد بسیاری در مدل سازی و درمان بیماری هایی مانند نارسایی های قلبی، دیستروفی عضلانی، پیوند سلول های مغزی برای درمان میگرن، تولید داروهای جدید و غیره دارند. در این مطالعه، از عضله جنین گوسفند 5060 روز، به منظور توصیف روش های جداسازی و کشت سلول های ماهواره ای، ترسیم منحنی رشد برای این سلول ها و تست عدم وجود مایکوپلاسما و باکتری استفاده شد. نمونه ها از کشتارگاه صنعتی مشهد جمع آوری شد. پس از هضم آنزیمی با کلاژناز، ترکیبی از سلول های ماهواره ای و غیر میوژنیک در کف فلاسک حاوی محیط DMEM کشت داده شدند. جهت جداسازی سلول هایی که میوژنیک نیستند مانند فیبروبلاست ها، بعد از 3 ساعت، فلاسک ها تعویض گردیدند. پس از شش روز، سلول ها به میوبلاست تمایز پیدا کردند. با استفاده از محیط تمایز حاوی سرم اسب، سلول های میوبلاست در فلاسک مشاهده شد، که تاییدی بر وجود سلول های ماهواره ای بودند. بیان mRNA ژن PAX7 برای تأیید حضور سلول های ماهواره ای مورد استفاده قرار گرفت. همچنین، نتایج نشان داد که سلول های ماهواره ای در یک کشت متوسط حاوی %5 FBS بدون تمایز رشد یافته و برای شروع تمایز به %10 FBS نیاز دارند.