|
|
|
|
purification and biological analysis of specific antigens (esat6/cfp10) from mycobacterium tuberculosis
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
mojgani naheed ,babaie mahdi ,shakibamehr nafiseh ,mohammad taheri mohammad ,mosavari nader ,ghaempanah aram ,soleymani babadi kioomars
|
|
منبع
|
iranian journal of veterinary science and technology - 2020 - دوره : 12 - شماره : 2 - صفحه:59 -67
|
|
چکیده
|
The pathogenesis of mycobacterium tuberculosis (mtb) is related to its low molecular weight proteins mainly esat6 and cfp10 that are highly specific and potentially useful for the diagnosis of tuberculosis. this research focused on isolation, purification, and characterization of low molecular weight proteins from mtb. cultures of mtb were inactivated by heating at 68 °c for 90 min and 100 °c for 3 hrs, respectively. inactivated cultures were filtered and the proteins inthe supernatant fluid precipitated with two rounds of ammonium sulfate, at 4 °c. the collected precipitates were dialyzed and subjected to gel chromatography (g-50) and the obtained fractions were analyzed for protein concentrations and molecular weight. esat6 and cfp10 protein complex in the purified fraction was confirmed by western blotting. guinea pig sensitization assay was used for estimating the potency of the purified fraction compared to the standard ppd. the maximum amount of low molecular weight proteins were precipitated by 20% ammonium sulfate. sds-page analysis revealed protein bands of approximately 10-15 kda. the purity of the proteins was ≥95%, as confirmed by sds-page. the presence of the esat-6/cfp10 complex was confirmed by western blot analysis. the purified fractions showed no cross-reaction with bcg or m. avium strain. esat-6/cfp-10 purified by the ammonium sulfate methodappeared to be suitable for the development of a diagnostic kit for the detection of mtb.
|
|
کلیدواژه
|
mycobacterium tuberculosis ,esat-6/cfp10 ,ammonium sulphate ,chromatography ,western blotting
|
|
آدرس
|
agricultural research education and extension organization (areeo), razi vaccine and serum research institute, reference laboratory of bovine tuberculosis, iran, agricultural research education and extension organization (areeo), razi vaccine and serum research institute, reference laboratory of bovine tuberculosis, iran, agricultural research education and extension organization (areeo), razi vaccine and serum research institute, reference laboratory of bovine tuberculosis, iran, agricultural research education and extension organization (areeo), razi vaccine and serum research institute, reference laboratory of bovine tuberculosis, iran, agricultural research education and extension organization (areeo), razi vaccine and serum research institute, reference laboratory of bovine tuberculosis, iran, agricultural research education and extension organization (areeo), razi vaccine and serum research institute, reference laboratory of bovine tuberculosis, iran, agricultural research education and extension organization (areeo), razi vaccine and serum research institute, reference laboratory of bovine tuberculosis, iran
|
|
پست الکترونیکی
|
q.soleymani@rvsri.ac.ir
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
خالص سازی و تجزیه و تحلیل بیولوژیکی آنتی ژن‌های خاص (ESAT6/CFP10) مایکوباکتریوم توبرکلوزیس
|
|
|
|
|
Authors
|
مژگانی ناهید ,بابائی مهدی ,شکیبامهر نفیسه ,محمدطاهری محمد ,مصوری نادر ,قائم پناه آرام ,سلیمانی بابادی کیومرث
|
|
Abstract
|
بیماری‌زایی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس (Mtb) مربوط به پروتئین‌های با وزن مولکولی پایین آن به طور عمده ESAT6 و CFP10 است که برای تشخیص سل بسیار خاص و بالقوه هستند. این تحقیق بر جدا سازی، خالص سازی و تعیین خصوصیات پروتئین‌های با وزن مولکولی پایین Mtb تمرکز دارد. کشت‌های Mtb به ترتیب با حرارت در 68 ºC به مدت 90 دقیقه و ºC 100 به مدت 3 ساعت غیرفعال گردیدند. کشت‌های غیرفعال، فیلتر شدند و پروتئین‌های مایع رویی در دو مرحله با آمونیوم سولفات در دمای ºC 4 رسوب داده شدند. رسوبات حاصله دیالیز شدند و ژل کروماتوگرافی (G50) انجام گرفت. فراکسیون‌های به دست آمده برای تعیین غلظت پروتئین و وزن مولکولی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. کمپلکس پروتئینی ESAT6 و CFP10 در فراکسیون خالص شده با وسترن بلات تایید شد. از روش سنجش حساسیت خوکچه هندی برای تخمین قدرت بیماری‌زایی فراکسیون خالص شده در مقایسه با PPD استاندارد استفاده شد. حداکثر مقدار پروتئین‌های با وزن مولکولی پایین آمونیوم سولفات 20% رسوب داده شدند. تجزیه و تحلیل SDSPAGE باندهای پروتئینی تقریباً 1015 کیلو دالتونی را نشان داد. خلوص پروتئین حدود 95≤، بود که توسط SDSPAGE تایید گردید. حضور کمپلکس ESAT6/CFP10 با تجزیه و تحلیل وسترن بلات تأیید شد. فراکسیون‌های خالص شده هیچ واکنش متقاطعی با سویه BCG یا مایکوباکتریوم اویوم نشان ندادند. به نظر می‌رسد ESAT6/CFP10 خالص شده با روش آمونیوم سولفات برای توسعه کیت تشخیصی برای تشخیص Mtb مناسب می‌باشد.
|
|
Keywords
|
ESAT-6/CFP10،
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|