کلون و بیان ژن رسپتور ویتامین B12 (btuB) از باکتری E. coli O157 H7

ژن btubاز باکتریe. coli o157:h7 از 1845 جفت باز تشکیل شده است. این ژن پروتیین btub را کد می‏کند که پروتیین انتقال‏دهنده‏ی ویتامین b12نامیده می‏شود. پروتیین btubبرای جذب کوبالامین در باکتری e. coli ضروری است. این انتقال دهنده دارای دو بخش است: بخش بشکه‏ی بتا و بخش توپی. بخش توپی کانال بشکه‏ی بتا را مسدود می‏کند. ویتامین b12 در حضور کلسیم با گرایش زیاد به پروتیین btub جذب می‏شود. لوپ‏های خارج سلولی l2 و l3 به ویتامین b12 متصل می‏شوند. ژن کدکننده‏ی پروتیین btub از باکتری e. coli o157:h7 تکثیر گردید. این ژن بصورت پروتیین واجد his (6) –tagged در انتهای c کلون و بیان گردید. ژن btub با طراحی پرایمر ویژه با pcr تکثیر می‏شود. محصول pcrو وکتور انتخابی با آنزیم‏های تحدیدی برش و به هم متصل می‏شوند و تولید سازه‏ای (construct) را می‏کنند که به میزبان de3) e. coli bl21( انتقال می‏یابند (transformation)، سپس سلول‏های ترانسفورم شده پس از القا با iptg و پس از آنالیز sds-page کل پروتیین فقط یک باند مشخص با وزن مولکولی kda 66 را آشکار کرد. با خالص‏سازی پروتیین btub وزن مولکولی دقیق آن معین گردید. با توجه به اینکه این پروتیین دارای لوپ های خارج سلولی فراوانی می باشد از این رو یکی از اهداف این پژوهش تولید و شناسایی پروتیین اتصالی پری پلاسمی انتقال دهنده ویتامین b12 (btub) از باکتریe. coli o157:h7 و هدف دیگر تعیین وزن دقیق مولکولی پروتیین btub است.