طراحی سازه‌های اگروباکتریومی به منظور تولید گیاهان تراریخته مقاوم به شوری، خشکی و سرما فاقد نشانگر آنتی‌بیوتیکی

در بیشتر مطالعات مرتبط با انتقال ژن به گیاهان، از ژن‌های مقاومت به آنتیبیوتیک برای بازیابی گیاهان تراریخته استفاده می‌شود، اما معرفی چنین محصولاتی به درون زنجیره غذایی ممکن است نگرانی‌هایی را از لحاظ ایمنی‌زیستی منجر گردد. در این تحقیق ژن بتایین‌آلدهید دهیدروژناز (badh) به عنوان یک نشانگر غیرآنتی‌بیوتیکی ایمن و با ارزش، در ساخت وکتورهای اگروباکتریومی مناسب برای تراریزش گیاهان مورد استفاده قرار گرفت. توالی ژن مذکور از منشا اسفناج از 6111 جفت باز با دربرداشتن چهارده اینترون، به 1494 جفت‌باز پس از حذف اینترون‌ها کاهش یافت و با تغییر توالی نوکلیوتیدی بدون تغییر در اسیدآمینه، هشت جایگاه‌های آنزیمی داخلی ناحیه کدکننده این ژن حذف گردید. توالی قسمت کُد کننده ژن badh که با ناحیه بدون ترجمه ‘5 مربوط به t7gene10 فاژی همجوش شده و در وکتور پلاستیدی pb کلون‌سازی گردیده بود، طی مراحلی پس از هضم آنزیمی دوگانه، صاف نمودن انتهای چسبنده قطعه، ایجاد کدون آغازین atg و افزودن تک نوکلیوتید آدنین، ابتدا در ناقل اولیه ptz57t/a کلون‌سازی شده و سپس در ناحیه t-dnaی دو حامل دوگانه اگروباکتریومی کلون‌سازی مجدد گردید. دو حامل نوترکیب نهایی pbi-badh و pbi(-k)badh در این تحقیق حاصل شدند که ژن بتایین‌آلدهید دِهیدروژناز را تحت پیشبر camv35s و پایانبر nos دربر دارند. حامل pbi(-k)badh فاقد هر گونه نشانگر آنتی‌بیوتیکی بوده و می‌تواند به تنهایی برای تراریزش گیاهان با هدف ایجاد مقاومت بالا به شوری، خشکی و سرما، مورد استفاده قرار گیرد. امکان کلون‌سازی کاست‌های ژنی دیگر ایجادکننده صفات با ارزش در این ناقل درنظر گرفته شده است که استفاده از آن ها می‌تواند به تولید گیاهان تراریخته چندمنظوره عاری از نشانگر و فاقد نگرانی‌های ایمنی زیستی منجر گردد.