ساخت ناقل لنتی ویروسی بر پایه ویروسhiv-1 با کاربری انتقال ژن به سلول‌های تقسیم شونده و غیر تقسیم شونده

چکیدهمقدمه:روش‌های زیستی انتقال ژن یا استفاده از ناقل‌های ویروسی، کاربرد گسترده‌ای در اهداف درمانی دارد. استفاده از ناقل های لنتی ویروسی با داشتن مزایایی چون توانایی آلوده‌سازی سلول‌های تقسیم شونده و غیر تقسیم شونده، توان حمل قطعه ژنی بزرگ و بیان پایدار ژن خارجی، ابزاری مناسب برای انتقال ژن در کاربردهای تحقیقاتی و درمانی به شمار می‌آیند. هدف از این پژوهش تولیدیک ناقل لنتی ویروسی بر مبنای (hiv-1human immunodeficiency virus) با پوششی از ویروس وزیکولار استوماتیس(vesicular stomatitis virus glycoprotein-g: vsvg) بود. این ناقل می‌تواند به عنوان وسیله‌ای برای انتقال ژن به سلول‌های تقسیم شونده و غیر تقسیم شونده، در انواع مطالعات تحقیقاتی و درمانی، مورد استفاده قرار بگیرد.مواد و روش‌ها:روش کلسیم فسفات برای ترنسفکشن همزمان سه پلاسمید شامل پلاسمید بیان کننده ژن خارجی به همراه گزارشگر بیانی(pwpxl-gfp)، پلاسمید بیان کننده پروتیین‌هایgag و polpspax2 و پلاسمید بیان کننده گلیکوپروتیین پوشش(pmd2.g)، بر روی رده سلولی کلیه جنین انسان، انجام گرفت. تایید ترانسفکشن با استفاده از فلوسیتومتری انجام گرفت و پس از تغلیظ ویروس‌ها، ترانسداکشن بر رده سلولی هدف انجام شد. یافته‌ها:نتایج فلوسیتومتری بیان 37/ 51 درصد از ژن گزارشگر پروتیین سبز فلورسانت(green fluorescent protein:gfp) را در سلول‌های ترانسفکت شده نشان داد. پس از تغلیظ ویروس و انجام ترانسداکشن؛ دخول پروویروس به ژنوم سلول هدف و بیان طولانی مدت gfp در این سلول‌هابامشاهدهبه وسیله میکروسکوپ فلورسانت، 15روز پس از ترانسداکشن ارزیابی شد و نتایج مثبت گزارش شد.نتیجه‌گیری:بیان ژن گزارشگر در سلول‌ها،پس از ترانسداکشن، صحت ورود ناقل ویروسی را به سلول‌ها نشان داد و به این ترتیب ناقل تولید شده در این پژوهش علاوه بر کارایی انتقال ژن به دلیل ماهیت لنتی ویروسی آن، توانایی انتقال ژن به سلول‌های غیر تقسیم شونده را نیز علاوه بر سلول‌های تقسیم شونده دارا می‌باشدکه موجب کاربرد گسترده تر آن، نسبت به سایر ناقل‌های ویروسی، در مطالعات انتقال ژن می‌شود.کلید واژه‌ها:انتقال ژن، ناقل لنتی ویروسی، ترانسفکشن، کلسیم فسفات، ترانسداکشن